1.一种检测肝素钠含量的方法,其特征在于,包括:
(1)配置储备溶液
1)肝素钠标准溶液:精确称量0.0324g的肝素钠到1000mL的容量瓶中,加入去离子水,溶解后,再定容至刻度线,得到浓度为0.0324g/L的肝素钠储备溶液;
2)亚甲基蓝溶液:精确称量亚甲基蓝0.1247g到250mL的容量瓶中,用去离子水溶解,再定容至刻度线,得到浓度为0.499g/L的亚甲基蓝溶液,配置好的亚甲基蓝溶液在实验期间避光保存;
3)硫酸钠溶液:精确称量4.2612g的无水硫酸钠到100mL的容量瓶中,用去离子水溶解,再定容至刻度线,得到浓度为0.3mol/L的硫酸钠储备溶液;
(2)建立离子强度对肝素钠与亚甲基蓝紫外影响的线性关系
五个25mL容量瓶中加入0.5mL亚甲基蓝溶液,1mL肝素钠储备溶液,然后依次往五个容量瓶中加入体积为0mL、0.25mL、0.5mL、0.75mL、1mL的硫酸钠储备溶液,避光反应15分钟后,在664nm处利用紫外可见分光光度计测定吸光度;以离子强度为横坐标,吸光度为纵坐标得到一条线性直线和该直线的斜率;离子强度计算公式为: 其中:I是离子强度,单位mol/L,Ci是离子i的质量摩尔浓度,单位mol/kg,Zi是离子i所带的电荷数;物质的量浓度和质量摩尔浓度的换算:物质的量浓度=质量摩尔浓度×密度;
(3)建立不同浓度肝素钠在不同离子强度作用下与亚甲基蓝相互作用的线性关系检测体系中当肝素钠浓度不同时离子强度对其与亚甲基蓝结合的影响程度不同,反映在其吸光度的变化即直线的斜率不同,该斜率随着肝素钠浓度的增加而增大,25mL容量瓶中肝素钠储备溶液的用量为1mL、1.5mL、2mL、2.5mL和3mL时,固定亚甲基蓝溶液的浓度,在离子强度为0到0.05mol/L范围内,测定吸光度,得到离子强度‑吸光度的线性直线和回归方程;进一步将肝素钠溶液的浓度和不同肝素钠浓度下离子强度与吸光度所得直线的斜率作图,获得肝素钠浓度和斜率的回归方程为K=4665.8C‑5.0333,式中K为斜率,C为浓度,相关2
系数R为0.9956;
(4)方法的准确度和重复性检测
配置肝素钠待测液的浓度分别为0.00148g/L,0.00240g/L和0.00360g/L,并检测3个待测液与亚甲基蓝在不同离子强度下的斜率,带入K=4665.8C‑5.0333的回归方程,得到肝素钠的含量,回收率在93.16%到105.50%之间,三次重复实验的标准偏差在1.42%到3.30%之间。