欢迎来到知嘟嘟! 联系电话:13095918853 卖家免费入驻,海量在线求购! 卖家免费入驻,海量在线求购!
知嘟嘟
我要发布
联系电话:13095918853
知嘟嘟经纪人
收藏
专利号: 2021108855169
申请人: 长江大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-10
缴费截止日期: 暂无
价格&联系人
年费信息
委托购买

摘要:

权利要求书:

1.一种鉴别非洲猪瘟基因缺失株的巢式PCR检测引物组,其特征在于,针对pDP71L基因缺失株,外侧引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示,内侧引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示;

针对DP96R基因缺失株,外侧引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示,内侧引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示;

针对A276R基因缺失株,外侧引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示,内侧引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示;

针对MGF360‑12L基因缺失株,外侧引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示,内侧引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16所示。

2.一种鉴别非洲猪瘟基因缺失株的巢式PCR检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括权利要求1所述的引物组。

3.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括PCR扩增试剂。

4.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述PCR扩增试剂包括:5U/μL的TaKaRa Ex Taq,20mM的10×Ex Taq Buffer,dNTP,外侧引物或内侧引物,模板。

5.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括阳性对照品和阴性对照品。

6.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,所述阳性对照品包含非洲猪瘟病毒pDP71L或非洲猪瘟病毒DP96R或非洲猪瘟病毒A276R或非洲猪瘟病毒MGF360‑12L基因缺失株的质粒DNA。

7.一种非疾病诊断目的的鉴别非洲猪瘟基因缺失株的巢式PCR检测方法,其特征在于,包括以下步骤:

S1.从样品中提取病毒核酸;

S2.以S1所述的病毒核酸为模板,用权利要求1所述的外侧引物进行第一次PCR扩增反应获得扩增产物A;

S3.以S2所述的扩增产物A为模板,用权利要求1所述的内侧引物进行第二次PCR扩增反应获得扩增产物B;

S4.将S3所述的扩增产物B进行琼脂糖凝胶电泳分析,在凝胶成像系统下观察结果,确定病毒类型。

8.根据权利要求7所述的检测方法,其特征在于,所述第二次PCR扩增的特异性条带为:针对pDP71L基因缺失株的特异性条带片段为118bp;针对DP96R基因缺失株的特异性条带片段为174bp;针对A276R基因缺失株的特异性条带片段为228bp;针对MGF360‑12L基因缺失株的特异性条带片段为187bp。

9.根据权利要求7所述的检测方法,其特征在于,所述S2第一次PCR扩增反应条件包括:

98℃预变性4‑6min;98℃变性10s,55℃退火35s,72℃延伸45s,共35个循环;最后72℃延伸

4min。

10.根据权利要求7所述的检测方法,其特征在于,所述S3第二次PCR扩增反应条件包括:95℃预变性5min;98℃变性10s,57℃退火35s,72℃延伸45s,共35个循环;最后72℃延伸

4min。