1.一种鉴别非洲猪瘟基因缺失株的巢式PCR检测引物组,其特征在于,针对pDP71L基因缺失株,外侧引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示,内侧引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示;
针对DP96R基因缺失株,外侧引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示,内侧引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示;
针对A276R基因缺失株,外侧引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示,内侧引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示;
针对MGF360‑12L基因缺失株,外侧引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示,内侧引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16所示。
2.一种鉴别非洲猪瘟基因缺失株的巢式PCR检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括权利要求1所述的引物组。
3.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括PCR扩增试剂。
4.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述PCR扩增试剂包括:5U/μL的TaKaRa Ex Taq,20mM的10×Ex Taq Buffer,dNTP,外侧引物或内侧引物,模板。
5.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括阳性对照品和阴性对照品。
6.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,所述阳性对照品包含非洲猪瘟病毒pDP71L或非洲猪瘟病毒DP96R或非洲猪瘟病毒A276R或非洲猪瘟病毒MGF360‑12L基因缺失株的质粒DNA。
7.一种非疾病诊断目的的鉴别非洲猪瘟基因缺失株的巢式PCR检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1.从样品中提取病毒核酸;
S2.以S1所述的病毒核酸为模板,用权利要求1所述的外侧引物进行第一次PCR扩增反应获得扩增产物A;
S3.以S2所述的扩增产物A为模板,用权利要求1所述的内侧引物进行第二次PCR扩增反应获得扩增产物B;
S4.将S3所述的扩增产物B进行琼脂糖凝胶电泳分析,在凝胶成像系统下观察结果,确定病毒类型。
8.根据权利要求7所述的检测方法,其特征在于,所述第二次PCR扩增的特异性条带为:针对pDP71L基因缺失株的特异性条带片段为118bp;针对DP96R基因缺失株的特异性条带片段为174bp;针对A276R基因缺失株的特异性条带片段为228bp;针对MGF360‑12L基因缺失株的特异性条带片段为187bp。
9.根据权利要求7所述的检测方法,其特征在于,所述S2第一次PCR扩增反应条件包括:
98℃预变性4‑6min;98℃变性10s,55℃退火35s,72℃延伸45s,共35个循环;最后72℃延伸
4min。
10.根据权利要求7所述的检测方法,其特征在于,所述S3第二次PCR扩增反应条件包括:95℃预变性5min;98℃变性10s,57℃退火35s,72℃延伸45s,共35个循环;最后72℃延伸
4min。