1.一种利用mRNA和microRNA相对表达量联合推断大鼠骨骼肌挫伤程度的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)提供用于判别大鼠骨骼肌挫伤程度的判别函数,该大鼠骨骼肌挫伤程度的判别函数包括:
A1=0.069a+0.611f+26.933c‑0.127e‑0.218g+7.385h‑0.544j+2.195l‑19.251;
A2=0.138a+1.374f+34.003c+0.097e+0.948g+2.554h+2.098j‑2.775l‑28.960;
A3=0.189a+3.019f+38.958c‑0.081e+0.898g+1.249h+1.119j‑4.250l‑34.496;
上述判别函数中,以Cxcr2、Abcd2、Rpa3、Ahsp、Rrm2、miR‑300‑3p、miR‑139‑5p、miR‑
503‑5p为判别变量,其中a表示Cxcr2,f表示Abcd2,c表示Rpa3,e表示Ahsp,g表示Rrm2,l表示miR‑300‑3p,h表示miR‑139‑5p,j表示miR‑503‑5p;
(2)检测待测样本中目的基因的相对表达量,将其依次带入各大鼠骨骼肌挫伤程度的判别函数中,计算A1、A2和A3的判别函数数值;当其中A1最大时,则该待测样本为大鼠骨骼肌未损伤样本;当其中A2最大时,则该待测样本为大鼠骨骼肌轻度挫伤样本;当其中A3最大时,则该待测样本为大鼠骨骼肌重度挫伤样本。
2.根据权利要求1所述的一种利用mRNA和microRNA相对表达量联合推断大鼠骨骼肌挫伤程度的方法,其特征在于,检测待测样本中目的基因的相对表达量的方法包括如下步骤:①提取待测样本中的总RNA:TRIzol法提取骨骼肌中总RNA;
②总RNA质检:依据Infinite M200 Pro酶标仪检测RNA溶液对波长260nm和280nm处光的吸收值,通过OD260/280比值计算RNA纯度;利用Agilent RNA 6000 Nano kit试剂盒和Agilent 2100仪测量总RNA完整性;
③获得目的基因mRNA和microRNA的表达谱:上述总RNA反转录成cDNA,进行实时定量扩增,获得目的基因的相对表达谱。
3.根据权利要求2所述的一种利用mRNA和microRNA相对表达量联合推断大鼠骨骼肌挫伤程度的方法,其特征在于,获得目的基因的相对表达量时,利用Rpl13 mRNA和Rpl32 mRNA作为检测指标中mRNA表达量标准化的内参、U6作为检测指标中microRNA表达量标准化的内‑△△Ct
参,通过2 法计算目的基因的相对表达量。
4.一种利用mRNA和microRNA相对表达量联合推断轻度挫伤大鼠骨骼肌不同损伤时间的方法,其特征在于,包括以下步骤:
㈠依据权利要求1或2或3所述方法,判断大鼠骨骼肌挫伤程度;
㈡当大鼠骨骼肌挫伤程度为轻度挫伤时,提供用于判别轻度挫伤程度的大鼠骨骼肌损伤时间的判别函数,该轻度挫伤程度的大鼠骨骼肌损伤时间的判别函数包括:B1=0.249a+0.505f+12.568d+34.031c‑0.102e+1.349g+0.272j‑26.228;
B2=0.439a+11.912f+12.350d+28.228c+0.576e+1.233g+3.017j‑60.710;
B3=2.459a+3.732f+5.481d+42.827c+0.085e‑0.601g‑0.727j‑82.789;
B4=2.345a‑1.071f+4.467d+51.463c‑0.236e+0.164g‑1.105j‑78.590;
B5=0.791a‑2.183f+9.598d+45.109c‑0.296e+3.513g‑0.114j‑43.026;
B6=‑0.038a+3.497f+13.912d+35.117c‑0.384e+9.559g+3.089j‑79.955;
上述判别函数中,以Cxcr2、Abcd2、Rpa3、Rbp7、Ahsp、Rrm2、miR‑503‑5p为判别变量,以未损伤组、损伤后0.5‑3小时、损伤后6小时、损伤后12小时、损伤后24小时和损伤后48小时为分组变量,其中a表示Cxcr2,f表示Abcd2,c表示Rpa3,d表示Rbp7,e表示Ahsp,g表示Rrm2,j表示miR‑503‑5p;
㈢将轻度挫伤的大鼠骨骼肌目的基因的相对表达量依次带入各轻度挫伤程度的大鼠骨骼肌损伤时间的判别函数中,计算B1、B2、B3、B4、B5和B6的判别函数数值;当其中B1最大时,则该轻度挫伤的大鼠骨骼肌属于未损伤组;当其中B2最大时,则该轻度挫伤的大鼠骨骼肌损伤时间为0.5‑3小时;当其中B3最大时,则该轻度挫伤的大鼠骨骼肌损伤时间为6小时;
当其中B4最大时,则该轻度挫伤的大鼠骨骼肌损伤时间为12小时;当其中B5最大时,则该轻度挫伤的大鼠骨骼肌损伤时间为24小时;当其中B6最大时,则该轻度挫伤的大鼠骨骼肌损伤时间为48小时。
5.根据权利要求4所述的一种利用mRNA和microRNA相对表达量联合推断轻度挫伤大鼠骨骼肌不同损伤时间的方法,其特征在于,当判别轻度挫伤的大鼠骨骼肌损伤时间为0.5‑3小时时,提供用于判别具体损伤时间的判别函数,该具体损伤时间的判别函数包括:C1=‑0.525a+2.231f+61.270c+0.194e+5.953g‑1.081j‑35.407;
C2=‑1.881a+13.468f+95.114c+1.207e+9.861g+0.886j‑129.879;
C3=‑1.140a+14.544f+71.778c+0.968e+3.622g+2.652j‑88.089;
C4=‑0.340a+12.838f+46.363c+0.728e‑1.216g+3.930j‑55.752;
上述判别函数中,以Cxcr2、Abcd2、Rpa3、Ahsp、Rrm2、miR‑503‑5p为判别变量,以未损伤组、损伤后0.5小时、损伤后1‑1.5小时和损伤后3小时为分组变量,其中a表示Cxcr2,f表示Abcd2,c表示Rpa3, e表示Ahsp,g表示Rrm2,j表示miR‑503‑5p;
将轻度挫伤的大鼠骨骼肌目的基因的相对表达量依次带入各具体损伤时间的判别函数中,计算C1、C2、C3和C4的判别函数数值;当其中C1最大时,则该轻度挫伤的大鼠骨骼肌属于未损伤组;当其中C2最大时,则该轻度挫伤的大鼠骨骼肌损伤时间为0.5小时;当其中C3最大时,则该轻度挫伤的大鼠骨骼肌损伤时间为1‑1.5小时;当其中C4最大时,则该轻度挫伤的大鼠骨骼肌损伤时间为3小时。
6.根据权利要求5所述的一种利用mRNA和microRNA相对表达量联合推断轻度挫伤大鼠骨骼肌不同损伤时间的方法,其特征在于,当判别轻度挫伤的大鼠骨骼肌损伤时间为1‑1.5小时时,提供用于判别具体损伤时间的判别函数,该具体损伤时间的判别函数包括:D1=9.388f+0.303e+4.487j‑8.187;
D2= 35.990f+1.753e+13.282j‑104.303;
D3=36.033f+2.024e+18.031j‑125.006;
上述判别函数中,以Abcd2、Ahsp、miR‑503‑5p为判别变量,以未损伤组、损伤后1小时和损伤后1.5小时为分组变量,其中f表示Abcd2,e表示Ahsp,j表示miR‑503‑5p;
将轻度挫伤的大鼠骨骼肌目的基因的相对表达量依次带入各具体损伤时间的判别函数中,计算D1、D2和D3的判别函数数值;当其中D1最大时,则该轻度挫伤的大鼠骨骼肌属于未损伤组;当其中D2最大时,则该轻度挫伤的大鼠骨骼肌损伤时间为1小时;当其中D3最大时,则该轻度挫伤的大鼠骨骼肌损伤时间为1.5小时。
7.一种利用mRNA和microRNA相对表达量联合推断重度挫伤大鼠骨骼肌不同损伤时间的方法,其特征在于,包括以下步骤:
㈠依据权利要求1或2或3所述方法,判断大鼠骨骼肌挫伤程度;
㈡当大鼠骨骼肌挫伤程度为重度挫伤时,提供用于判别重度挫伤程度的大鼠骨骼肌损伤时间的判别函数,该重度挫伤程度的大鼠骨骼肌损伤时间的判别函数包括:E1=0.146a‑2.548f+0.208b+86.531c+0.102e‑3.290g+12.168h‑0.309i+13.753l‑
54.990;
E2=0.203a+5.088f+0.459b+106.829c+0.668e‑3.156g+12.675h+7.612i‑14.571l‑
94.880;
E3=0.078a+7.162f+1.799b+141.503c+0.694e‑7.024g+16.767h‑4.640i+3.625l‑
288.209;
E4=0.347a‑2.686f+0.402b+139.581c+0.340e‑4.380g+0.470h‑3.654i+8.435l‑
113.268;
E5=0.167a+1.100f+0.203b+81.757c+0.155e+1.460g+6.031h+2.254i‑3.857l‑
54.698;
上述判别函数中,以Cxcr2、Abcd2、Rpa3、Trem‑1、Ahsp、Rrm2、miR‑300‑3p、miR‑139‑5p、miR‑345‑5p为判别变量,以未损伤组、损伤后0.5‑3小时、损伤后6小时、损伤后12‑24小时和损伤后48小时为分组变量,其中a表示Cxcr2,f表示Abcd2,c表示Rpa3,b表示Trem‑1,e表示Ahsp,g表示Rrm2,l表示miR‑300‑3p,h表示miR‑139‑5p,i表示miR‑345‑5p;
㈢将重度挫伤的大鼠骨骼肌目的基因的相对表达量依次带入各重度挫伤程度的大鼠骨骼肌损伤时间的判别函数中,计算E1、E2、E3、E4和E5的判别函数数值;当其中E1最大时,则该重度挫伤的大鼠骨骼肌属于未损伤组;当其中E2最大时,则该重度挫伤的大鼠骨骼肌损伤时间为0.5‑3小时;当其中E3最大时,则该重度度挫伤的大鼠骨骼肌损伤时间为6小时;
当其中E4最大时,则该重度挫伤的大鼠骨骼肌损伤时间为12‑24小时;当其中E5最大时,则该重度挫伤的大鼠骨骼肌损伤时间为48小时。
8.根据权利要求7所述的一种利用mRNA和microRNA相对表达量联合推断重度挫伤大鼠骨骼肌不同损伤时间的方法,其特征在于,当判别重度挫伤的大鼠骨骼肌损伤时间为0.5‑3小时时,提供用于判别具体损伤时间的判别函数,该具体损伤时间的判别函数包括:F1=‑6.577f‑0.938b+35.888d+196.570c+0.358e‑5.812l‑111.130;
F2=0.348f‑0.449b+41.203d+259.169c+0.781e‑25.802l‑203.703;
F3=2.162f+0.653b+30.428d+225.144c+0.712e‑24.694l‑168.377;
F4=5.560f+3.635b+18.747d+175.996c+0.068e‑17.210l‑202.125;
上述判别函数中,以Abcd2、Trem‑1、Rbp7、Rpa3、Ahsp、miR‑300‑3p为判别变量,以未损伤组、损伤后0.5小时、损伤后1‑1.5小时和损伤后3小时为分组变量,其中f表示Abcd2,b表示Trem‑1,d表示Rbp7,c表示Rpa3,e表示Ahsp,l表示miR‑300‑3p;
将重度挫伤的大鼠骨骼肌目的基因的相对表达量依次带入各具体损伤时间的判别函数中,计算F1、F2、F3和F4的判别函数数值;当其中F1最大时,则该重度挫伤的大鼠骨骼肌属于未损伤组;当其中F2最大时,则该重度挫伤的大鼠骨骼肌损伤时间为0.5小时;当其中F3最大时,则该重度挫伤的大鼠骨骼肌损伤时间为1‑1.5小时;当其中F4最大时,则该重度挫伤的大鼠骨骼肌损伤时间为3小时。
9.根据权利要求7所述的一种利用mRNA和microRNA相对表达量联合推断重度挫伤大鼠骨骼肌不同损伤时间的方法,其特征在于,当判别重度挫伤的大鼠骨骼肌损伤时间为12‑24小时时,提供用于判别具体损伤时间的判别函数,该具体损伤时间的判别函数包括:G1=87.272c‑1.937e+27.854l‑57.694;
G2=121.811c+4.348e‑6.193l‑87.475;
G3=145.107c+1.456e‑6.875l‑111.934;
上述判别函数中,以Rpa3、Ahsp、miR‑300‑3p为判别变量,以未损伤组、损伤后12小时和损伤后24小时为分组变量,其中c表示Rpa3,表示e表示Ahsp,l表示miR‑300‑3p;
将重度挫伤的大鼠骨骼肌目的基因的相对表达量依次带入各具体损伤时间的判别函数中,计算G1、G2、G3的判别函数数值;当其中G1最大时,则该重度挫伤的大鼠骨骼肌属于未损伤组;当其中G2最大时,则该重度挫伤的大鼠骨骼肌损伤时间为12小时;当其中G3最大时,则该重度挫伤的大鼠骨骼肌损伤时间为24小时。
10.根据权利要求8所述的一种利用mRNA和microRNA相对表达量联合推断重度挫伤大鼠骨骼肌不同损伤时间的方法,其特征在于,当判别重度挫伤的大鼠骨骼肌损伤时间为1‑
1.5小时时,提供用于判别具体损伤时间的判别函数,该具体损伤时间的判别函数包括:H1=‑0.429f‑0.014b+0.183e+21.473l‑11.705;
H2=6.980f+0.875b+0.633e+11.152l‑39.017;
H3=6.632f+1.546b+0.160e‑0.716l‑31.275;
上述判别函数中,以Abcd2、Trem‑1、Ahsp、miR‑300‑3p为判别变量,以未损伤组、损伤后
1小时、损伤后1.5小时为分组变量,其中f表示Abcd2,b表示Trem‑1,e表示Ahsp,l表示miR‑
300‑3p;
将重度挫伤的大鼠骨骼肌目的基因的相对表达量依次带入各具体损伤时间的判别函数中,计算H1、H2、H3的判别函数数值;当其中H1最大时,则该重度挫伤的大鼠骨骼肌属于未损伤组;当其中F2最大时,则该重度挫伤的大鼠骨骼肌损伤时间为1小时;当其中H3最大时,则该重度挫伤的大鼠骨骼肌损伤时间为1.5小时。