1.一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法,其特征在于该方法具体是按以下步骤完成的:
一、玻璃基底表面疏水基团的修饰:①、将疏水剂和甲苯混合均匀,得到疏水剂甲苯溶液;
②、将清洗干净的基底浸入到疏水剂甲苯溶液中组装4h~8h,取出后使用甲苯冲洗,再氮气吹干,得到表面组装疏水基团的基底,放入4℃冰箱保存备用;
二、基底上磷脂膜的铺展:
①、将表面组装疏水基团的基底置于等离子清洗机中氧化处理,得到含有纳米级亲水和疏水结构的基底;
②、首先将Tris缓冲液滴加到含有纳米级亲水和疏水结构的基底上,然后滴加磷脂囊泡溶液,磷脂囊泡下沉并与基底接触,破裂铺展在基底表面,最后使用Tris缓冲液冲洗掉剩余的磷脂囊泡,得到含有磷脂膜的基底;
③、将含有磷脂膜的基底在室温下继续孵育5min~120min,得到分离胆固醇后的磷脂膜。
2.根据权利要求1所述的一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法,其特征在于步骤一中所述的疏水剂为十八烷基三甲氧基硅烷或3‑氨丙基三乙氧基硅烷;步骤一中所述的疏水剂与甲苯的体积比为1:100。
3.根据权利要求1所述的一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法,其特征在于步骤一②中所述的基底为载玻片,基底的清洗过程如下:将基底在异丙醇中超声清洗10min~15min,再使用去离子水超声清洗10min~15min,最后使用氮气吹干,得到清洗干净的基底;所述的超声清洗的功率为250W~300W。
4.根据权利要求1所述的一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法,其特征在于步骤二①中所述的氧化处理的工艺条件如下:压力为0.2MPa,功率为300W,氧化处理的时间为1s~30s。
5.根据权利要求1所述的一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法,其特征在于
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步骤二②中所述的Tris缓冲液的体积与基底的表面积比(0.5mL~5mL):(3cm ~5cm);步骤
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二②中所述的磷脂囊泡溶液的体积与基底的表面积比(0.5μL~30μL):(3cm~5cm)。
6.根据权利要求1所述的一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法,其特征在于步骤二②中所述的Tris缓冲液中三羟甲基氨基甲烷的浓度为10mmol/L,NaCl的浓度为
150mmol/L,CaCl2的浓度为2mmol/L。
7.根据权利要求1所述的一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法,其特征在于步骤二②中所述的磷脂囊泡溶液的制备方法具体是按以下步骤完成的:(1)、将磷脂溶解到氯仿中,得到浓度为0.5mg/mL~20mg/mL的磷脂溶液;
(2)、将浓度为0.5mg/mL~20mg/mL的磷脂溶液均匀涂覆到洁净的ITO导电玻璃表面,再在温度为10℃~30℃下干燥2h~3h,得到表面覆盖有磷脂层的ITO导电玻璃;
(3)、将两块表面覆盖有磷脂层的ITO导电玻璃和玻璃框架组装成密闭的反应装置,向反应装置中注入反应介质溶液,再将表面覆盖有磷脂层的ITO导电玻璃的磷脂层与信号发4
生器相连接,在波形为正弦波、交流电压为1V~6V,频率为1Hz~10Hz的条件下反应5min~
120min,得到磷脂囊泡溶液。
8.根据权利要求7所述的一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法,其特征在于步骤(1)中所述的磷脂为1,2‑二油酰磷脂酰胆碱、1,2‑二棕榈酰油酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱和蛋黄卵磷脂中的一种或其中几种的混合物。
9.根据权利要求7所述的一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法,其特征在于步骤(3)中所述的反应介质溶液为蔗糖溶液、葡萄糖溶液或葡聚糖溶液;所述的反应介质溶液的浓度为10mmol/L~300mmol/L。
10.根据权利要求7所述的一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法,其特征在于步骤(1)中所述的磷脂中胆固醇所占的摩尔百分比为0.2~0.6。