1.一种鱼皮胶原蛋白肽的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:步骤(1)、鱼皮处理:用清水将鱼皮清洗干净,剪成小块,沥干;
步骤(2)、脱脂、脱色、除杂蛋白:将沥干的鱼皮和浓度为0.1M氢氧化钠溶液按照料液比
1:10~1:20混合,加入质量分数为30%的双氧水,进行脱脂、脱色,每6小时更换一次溶液,更换3~6次;将鱼皮和质量分数为2%的氯化钠溶液按照料液比1:10~1:20混合除杂蛋白,每6小时更换一次溶液,更换3~6次;再将鱼皮和无水乙醇按照料液比1:10~1:20混合搅拌
6小时,水洗至鱼皮无醇味,沥干;
步骤(3)、酶提取:按照料液比1:10~1:20将鱼皮加入浓度为1.0M的柠檬酸溶液,冰浴超声振荡,再加入鱼皮原料重量2%~4%的胃蛋白酶,在4~10℃下搅拌提取24~72小时,过滤除去鱼皮残渣,离心,得到上清液;
步骤(4)、调等电点沉淀胶原蛋白:用8M的氢氧化钠溶液调节上清液的pH为7,静置,待出现沉淀,离心,得到蛋白沉淀;
步骤(5)、双水相萃取法纯化蛋白:按照固液比1:10~1:20将蛋白沉淀加入(NH4)2SO4和聚乙二醇6000的双水相萃取体系中,搅拌均匀,振荡反应1h~3h,静置,分相,取上相萃取液;
步骤(6)、透析、冷冻干燥:将萃取液透析3~4天,每隔6小时换一次透析液,冷冻干燥,得到无色鱼皮胶原蛋白粉末;
步骤(7)、酶解:用超纯水将鱼皮胶原蛋白粉末水溶液,调节pH为9~11,加入碱性蛋白酶酶解;
步骤(8)、分离、冷冻干燥:经过酶解的胶原蛋白肽溶液采用装填葡聚糖凝胶G‑10的葡聚糖凝胶层析柱分离纯化,得到<700Da的蛋白肽溶液,冷冻干燥,得到无色鱼皮胶原蛋白肽粉末。
2.根据权利要求1所述的鱼皮胶原蛋白肽的制备方法,其特征在于:步骤(2)中,所述的双氧水和氢氧化钠溶液的体积比为1:100;
所述的脱脂、脱色在4~6℃下搅拌进行;脱脂、脱色后用水将鱼皮水洗至中性;
所述的除杂蛋白在4~6℃下搅拌进行;
所述的无水乙醇预冷至在4~6℃,在4~6℃下去残留的脂肪;用于洗涤的水预冷至4~
6℃。
3.根据权利要求1所述的鱼皮胶原蛋白肽的制备方法,其特征在于:步骤(3)中,超声振荡的功率为100W,时间为15~20min;
所述的离心的转速为2900~3510r/min,离心的时间为15~20min;
步骤(4)中,所述的离心的转速为2900~3510r/min,离心的时间为15~20min。
4.根据权利要求1所述的鱼皮胶原蛋白肽的制备方法,其特征在于:步骤(5)中,所述的双水相萃取体系为质量分数为14%~16%的(NH4)2SO4和质量分数为10%~14%的聚乙二醇6000的混合溶液。
5.根据权利要求1所述的鱼皮胶原蛋白肽的制备方法,其特征在于:步骤(6)中,透析采用截留分子量为10000Da的透析袋;所述的透析液为超纯水或0.5M乙酸溶液;
所述的冷冻干燥的温度为‑50℃~‑20℃。
6.根据权利要求1所述的鱼皮胶原蛋白肽的制备方法,其特征在于:步骤(7)中,用超纯水将鱼皮胶原蛋白粉末配成质量分数为2.5%的溶液;
加酶量为200000U/g,酶解温度为45~55℃,酶解时间为2~4小时。
7.一种鱼皮胶原蛋白肽喷雾剂,其特征在于:它是由包括以下重量份数的原料制成的:
30~55份权利要求1制得的鱼皮胶原蛋白肽、0.05~30份透明质酸钠、0.02~10份尼泊金类防腐剂、0.02~5份抗氧化剂、0.02~15份非离子型表面活性剂、0.02~5份十二烷基甲基亚砜、0.02~15份甘油和250~350份水。
8.根据权利要求7所述的鱼皮胶原蛋白肽喷雾剂,其特征在于:它是是由包括以下重量份数的原料制成的:30~45份鱼皮胶原蛋白肽、0.5~30份透明质酸钠、0.3~10份尼泊金类防腐剂、0.1~0.2份抗氧化剂、0.1~0.2份非离子型表面活性剂、0.1~2份十二烷基甲基亚砜、3~15份甘油和280~340份水。
9.根据权利要求7所述的鱼皮胶原蛋白肽喷雾剂,其特征在于:所述的尼泊金类防腐剂为对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯中的至少一种,优选为对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯重量比为1:1的组合;
所述的抗氧化剂为抗坏血酸;
所述的非离子型表面活性剂为聚山梨酯,优选为聚山梨酯20。
10.一种权利要求7所述的鱼皮胶原蛋白肽喷雾剂的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:
步骤(a)、将透明质酸钠、十二烷基甲基亚砜、抗坏血酸、非离子型表面活性剂分别溶于占超纯水总量1/5~1/4的超纯水中,搅拌溶解,得到透明质酸钠溶液、十二烷基甲基亚砜溶液、抗坏血酸溶液、非离子型表面活性剂溶液;将余量超纯水加热至35~40℃,加入鱼皮胶原蛋白肽,搅拌使其溶解,得到鱼皮胶原蛋白肽溶液;
步骤(b)、甘油水浴加热至沸,加入尼泊金类防腐剂,搅拌至溶解;
步骤(g)、取上述溶液,混合,滤过后分装至喷雾装置中,即得鱼皮胶原蛋白肽喷雾剂。