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专利号: 2021110804150
申请人: 湖北工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种R‑(+)‑2‑(4‑羟基苯氧基)丙酸的生物合成方法,其特征在于,所述方法包括:将球孢白僵菌Beauveria bassiana接种于PDA斜面进行斜面培养,获得PDA斜面孢子;

用无菌水将所述PDA斜面孢子洗下制得孢子悬浮液,后将所述孢子悬液接种至种子培养基中进行种子培养,获得发酵种子液;

将所述发酵种子液接种到固态发酵培养基中进行固态培养,所述固态培养中,每天从所述固体发酵培养基中进行取样,由高效液相色谱检测所述前体物PPA浓度;

当所述前体物PPA浓度低于10‑40 g/kg固态发酵培养基时开始补加PPA以控制所述前体物PPA浓度在10‑40 g/kg固态发酵培养基;其中,所述前体物PPA添加时,将所述前体物PPA制备成 pH为7‑12、浓度为45‑55%m/V的PPA溶液进行添加;每次所述前体物PPA的添加量为10‑20 g/kg固态发酵培养基;

最终所述PPA添加总量为50‑80 g/kg固态发酵培养基时停止补料;

其中,所述固态发酵培养基的配方为:干料200‑400 g/kg,其中,所述干料包括麸皮、稻壳、米糠、玉米糁和大米中的至少一种;微量元素溶液25‑50 ml/kg,加水使料水比1:(1.5‑

2.5),加入PPA溶液6‑32 ml,其中所述PPA溶液的浓度为500 g/L,用NaOH将溶液pH调整为7;

混合好后121℃灭菌20 min。

2.根据权利要求1所述的一种R‑(+)‑2‑(4‑羟基苯氧基)丙酸的生物合成方法,其特征在于,所述前体物PPA添加次数为1‑6次。

3.根据权利要求1所述的一种R‑(+)‑2‑(4‑羟基苯氧基)丙酸的生物合成方法,其特征在于,所述斜面培养的条件为:温度为27‑29℃,时间为3‑7d。

4.根据权利要求1所述的一种R‑(+)‑2‑(4‑羟基苯氧基)丙酸的生物合成方法,其特征在于,所述用无菌水将所述PDA斜面孢子洗下制得孢子悬浮液,后将所述孢子悬液接种至种子培养基中进行种子培养,获得发酵种子液,具体包括:

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用无菌水将PDA斜面孢子洗下制得孢子量为10‑10个/ml的孢子悬浮液,将所述孢子悬液按质量分数为1‑3%接种至种子培养基中进行种子培养,所述种子培养的条件为:温度为

25‑30℃、转速为200‑300 r/min,时间为36‑48 h,获得发酵种子液。

5.根据权利要求1所述的一种R‑(+)‑2‑(4‑羟基苯氧基)丙酸的生物合成方法,其特征在于,所述发酵种子液按质量分数为5‑10%接种到固态发酵培养基中,所述固态培养的条件为:温度为25‑30℃,时间为5‑21 d。

6.根据权利要求1所述的一种R‑(+)‑2‑(4‑羟基苯氧基)丙酸的生物合成方法,其特征在于,所述种子培养基的配方为:葡萄糖20 g/L,酵母粉10 g/L,七水合硫酸镁2 g/L,二水合氯化钙1 g/L,磷酸氢二钾1.8 g/L,磷酸二氢钾0.75 g/L,微量元素溶液50 ml/L;所述微量元素溶液的组成及含量为:EDTA‑2Na 2000 mg/L,七水合硫酸亚铁600 mg/L,七水合硫酸锌200 mg/L,一水合硫酸锰150 mg/L,硼酸30 mg/L,六水合氯化钴20 mg/L,二水合氯化铜

40 mg/L,二水合氯化镍40 mg/L,二水合钼酸钠5 mg/L,配置好后121℃灭菌20Min。