1.胰蛋白酶突变体,其特征在于,以SEQ ID NO.1所示氨基酸序列为亲本序列,将其第
167位取代成丙氨酸或丝氨酸。
2.编码权利要求1所述突变体的基因。
3.携带权利要求2所述基因的载体。
4.根据权利要求3所述的载体,其特征在于,所述载体包括但不限于pPIC9K、pPIC3K、pET系列载体、Duet系列、pGEX系列。
5.含有权利要求2所述基因或权利要求3或4所述载体的微生物细胞。
6.根据权利要求5所述的微生物细胞,其特征在于,所述微生物细胞包括但不限于大肠杆菌、毕赤酵母、枯草芽孢杆菌。
7.一种生产胰蛋白酶突变体的方法,其特征在于,利用权利要求5或6所述微生物细胞发酵生产胰蛋白酶突变体。
8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,将所述微生物细胞在BMGY培养基中培养至OD600为4‑6,收集菌体转接至新鲜的BMGY培养基,在发酵初始时及每隔20~24h按培养基体积的0.5~1%加入甲醇诱导表达,在28~30℃、700~750rpm培养不少于96h。
9.一种生产胰岛素的方法,其特征在于,以胰岛素前体为底物,将权利要求1所述胰蛋白酶突变体按不少于1000U/mg底物的量添加至反应体系中,在23~25℃下水解18~20小时结束反应。
10.权利要求1所述胰蛋白酶突变体或权利要求2所述基因或权利要求5或6所述微生物细胞在生产胰岛素或胰岛素类似物中的应用。