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专利号: 2021110885514
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.胰蛋白酶突变体,其特征在于,以SEQ ID NO.1所示氨基酸序列为亲本序列,将其第

167位取代成丙氨酸或丝氨酸。

2.编码权利要求1所述突变体的基因。

3.携带权利要求2所述基因的载体。

4.根据权利要求3所述的载体,其特征在于,所述载体包括但不限于pPIC9K、pPIC3K、pET系列载体、Duet系列、pGEX系列。

5.含有权利要求2所述基因或权利要求3或4所述载体的微生物细胞。

6.根据权利要求5所述的微生物细胞,其特征在于,所述微生物细胞包括但不限于大肠杆菌、毕赤酵母、枯草芽孢杆菌。

7.一种生产胰蛋白酶突变体的方法,其特征在于,利用权利要求5或6所述微生物细胞发酵生产胰蛋白酶突变体。

8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,将所述微生物细胞在BMGY培养基中培养至OD600为4‑6,收集菌体转接至新鲜的BMGY培养基,在发酵初始时及每隔20~24h按培养基体积的0.5~1%加入甲醇诱导表达,在28~30℃、700~750rpm培养不少于96h。

9.一种生产胰岛素的方法,其特征在于,以胰岛素前体为底物,将权利要求1所述胰蛋白酶突变体按不少于1000U/mg底物的量添加至反应体系中,在23~25℃下水解18~20小时结束反应。

10.权利要求1所述胰蛋白酶突变体或权利要求2所述基因或权利要求5或6所述微生物细胞在生产胰岛素或胰岛素类似物中的应用。