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专利号: 2021111550081
申请人: 湖南师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种Pirin同源蛋白的特征肽在Pirin同源蛋白的检测中的应用,其特征在于,所述特征肽的氨基酸序列为HSQPIPK、SIGRPELK或EQSEGVGAR;

所述Pirin同源蛋白的检测方法包括以下步骤:

将待测样品进行酶解处理,得到酶解产物;所述酶解处理包括以下步骤:将待测样品加热以使蛋白变性,冷却后加入尿素进行反应,然后加入胰蛋白酶处理;

将所述酶解产物进行二甲基化衍生处理,得到二甲基化产物;所述二甲基化衍生处理包括以下步骤:将甲醛溶液和氰基硼氢化钠溶液混合,然后再与所述酶解产物混合进行反应;

对所述二甲基化产物进行液质联用检测,分析其中所述特征肽的含量。

2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述胰蛋白酶与所述待测样品中蛋白质的质量比为1:18 22。

~

3.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述二甲基化衍生处理的反应时间为70~

90分钟。

4.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,在所述二甲基化衍生处理之前还包括以下步骤:将所述酶解产物上样至C18固相萃取柱,加入含0.8wt% 1.2wt%甲酸和2wt% 4wt%乙腈~ ~的水溶液进行清洗,然后加入含0.08wt% 0.12wt%甲酸、78wt% 82wt%乙腈的水溶液进行洗~ ~脱,收集洗脱液,得到纯化的酶解产物。

5.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述液质联用检测中液相色谱的条件为:色谱柱为Accucore Polar Premium C18,流动相A相为甲酸水溶液,流动相B相为甲酸乙腈溶液,流速为0.1mL/min 0.5mL/min,进样体积为1μL 5μL,洗脱方式为梯度洗脱。

~ ~

6.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述液质联用检测中质谱的条件为:离子源为电喷雾离子源,雾化气流速为2.5L/min 3.5L/min,干燥气流速为8L/min 12L/min,脱~ ~溶剂管温度为240℃ 260℃,加热模块温度为380℃ 420℃,离子源接口电压为3.8kV~ ~ ~

4.2kV,扫描模式为多反应监测。