1.一种检测乙酰胆碱酯酶浓度的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)制备近红外发射碳点纳米颗粒CDs;
(2)用硝酸处理步骤(1)所述CDs得到氧化型近红外发射碳点纳米颗粒CDs‑HNO3;
+
(3)将步骤(2)所述CDs‑HNO3与AgNO3溶液孵育过夜,得到Ag‑CDs‑HNO3;
+ +
(4)将上述步骤(3)中制得的Ag‑CDs‑HNO3用Tris‑HAc缓冲溶液配制为Ag‑CDs‑HNO3碳量子点溶液;
(5)配制等体积的氯化硫代乙酰胆碱溶液和乙酰胆碱酯酶标准溶液,混合反应后,得到混合液a;
+
(6)取与步骤(5)中混合液a等体积的步骤(4)中Ag ‑CDs‑HNO3碳量子点溶液,记为溶液b,将溶液a和溶液b混合反应后,得标准样品系c;
(7)取步骤(6)所述标准样品系c并检测其在681nm处的荧光强度,记为Fc;检测步骤(6)所述溶液b并检测其在681nm处的荧光强度,记为Fb;然后建立(Fc‑Fb)与乙酰胆碱酯酶浓度CAChE之间的线性关系式;
(8)配制与步骤(5)中乙酰胆碱酯酶标准溶液体积相同、浓度未知的乙酰胆碱酯酶待测+溶液,参照步骤(5)、(6)、(7)制得待测样品并测定其荧光强度Fc和Ag‑CDs‑HNO3碳量子点溶液b的荧光强度Fb,根据(Fc‑Fb)与乙酰胆碱酯酶浓度CAChE之间的线性关系式,即可计算出所述乙酰胆碱酯酶待测溶液中的乙酰胆碱酯酶的浓度。
2.如权利要求1所述的检测乙酰胆碱酯酶浓度的方法,其特征在于,在步骤(1)中,所述CDs的制备方法为:取0.1‑1g的谷胱甘肽和10‑20g的甲酰胺溶液,混合均匀后,在100‑200℃的高压反应釜中反应5‑15h,反应结束后,经过滤、透析、冷冻干燥,即得。
3. 如权利要求1所述的检测乙酰胆碱酯酶浓度的方法,其特征在于,步骤(2)中,所述CDs‑HNO3的制备方法为:称取10‑20mg步骤(1)中制备的CDs和10‑20μL浓度为10‑15mol/L的HNO3溶液,用20‑40mL H2O稀释,混合均匀后,在30‑100℃油浴下磁力搅拌回流12‑24h,将回流后的反应液过滤;用NaOH溶液调节过滤后的反应液,使其pH值至中性,经过滤、透析、冷冻干燥,即得。
4.如权利要求1所述的检测乙酰胆碱酯酶浓度的方法,其特征在于,步骤(3)中,所述Ag+‑CDs‑HNO3的制备方法为:称取10‑20mg的CDs‑HNO3,加入100‑300μL浓度为20‑60mmol/L的AgNO3溶液,用10‑30mL去离子水稀释,通入N2,在室温下搅拌10‑20h,搅拌结束后,经过滤、透析、冷冻干燥,即得。
5. 如权利要求1所述的检测乙酰胆碱酯酶浓度的方法,其特征在于,步骤(4)中,所述+ +Ag‑CDs‑HNO3碳量子点溶液的制备方法为:将步骤(3)中制得的Ag‑CDs‑HNO3用pH为7.4、浓+度为10mmol/L Tris‑HAC缓冲溶液配制为浓度为1‑20μg/mL的Ag‑CDs‑HNO3碳量子点溶液。
6.如权利要求1所述的检测乙酰胆碱酯酶浓度的方法,其特征在于,步骤(5)中,所述乙酰胆碱酯酶标准溶液的浓度为0.5mU/mL 30mU/mL,且上述溶液均采用Tris‑HAc缓冲溶液配~制,所述Tris‑HAc缓冲溶液的pH为7.4、浓度为10mmol/L。
7.如权利要求1所述的检测乙酰胆碱酯酶浓度的方法,其特征在于,步骤(5)中,所述乙酰胆碱酯酶标准溶液的具体配制方法为:先利用乙酰胆碱酯酶干粉配制浓度为1000mU/mL的原液,再将所述原液用所述Tris‑HAc缓冲溶液进行梯度稀释,即得。
8.如权利要求1所述的检测乙酰胆碱酯酶浓度的方法,其特征在于,步骤(5)中,混合反应的条件为:反应温度为20‑50℃、反应时间为20‑60min。
9.如权利要求1所述的检测乙酰胆碱酯酶浓度的方法,其特征在于,步骤(6)中,混合反应的条件为:反应温度为10‑30℃、反应时间为1‑5min。
10.如权利要求1所述的检测乙酰胆碱酯酶浓度的方法,其特征在于,步骤(7)中,荧光测定的条件为:激发波长为420nm,激发和发射狭缝均为5nm。