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专利号: 2021112038781
申请人: 浙江海洋大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种金枪鱼鱼卵降血压肽,其特征在于所述降压肽的氨基酸序列为:Trp‑Pro‑Phe‑Ala‑Cys‑Ser,ESI‑MS测定其分子量为709.8Da。

2.如权利要求1所述一种金枪鱼鱼卵降血压肽的制备方法,其特征在于包括以下步骤:将金枪鱼鱼卵微波和超声预处理、酶解、超滤、凝胶色谱分离和反相高效液相色谱制(RP‑HPLC)纯化,得到降压肽Trp‑Pro‑Phe‑Ala‑Cys‑Ser。

3.根据权利要求2所述一种金枪鱼鱼卵降血压肽的制备,其特征在于包括以下步骤:

1)金枪鱼鱼卵的预处理:将金枪鱼鱼卵解冻、除杂,然后加入双蒸水混合、匀浆,放置于电脑微波超声组合成/萃取仪中,在微波功率500W条件下,处理5min,取出冻干;冻干后的粉末加入乙酸乙酯混合,于室温3000W超声处理25min,离心出去上清液,得金枪鱼鱼卵粉末;

2)金枪鱼鱼卵酶解液的制备:将上述金枪鱼鱼卵粉末与甘氨酸‑NaOH缓冲液混合,调节4

混合液pH值至7.0,调温度至50℃,加入中性蛋白酶(5.0×10U/g),酶解3.5h;酶解液放于沸水种10min后,灭酶活,得金枪鱼鱼卵酶解液(STH);

3)金枪鱼鱼卵酶解液的超滤分级:将金枪鱼鱼卵酶解液(STH)采用1kDa,3.5kDa和5kDa超滤膜进行超滤处理,收集分子量小于1kDa(STH1),得超滤酶解物;

4)金枪鱼鱼卵降压肽的制备:将超滤酶解物(STH1)依次经Sephadex G‑15凝胶色谱和反相高效液相色谱(RP‑HPLC)纯化,得金枪鱼鱼卵降压肽。

4.根据权利要求3所述一种金枪鱼鱼卵降血压肽的制备,其特征在于所述Sephadex G‑

15凝胶色谱分离步骤如下:将超滤酶解物(STH1)配成50μg/mL溶液,经过葡聚糖凝胶G‑15柱层析分离,用双蒸水进行洗脱,根据220nm下的吸光度曲线收集洗脱组分,测定各组分的血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性,具有最高ACE抑制活性的组分即为凝胶层析酶解物;

所述RP‑HPLC纯化步骤如下:将凝胶层析酶解物配成45μg/mL溶液,利用RP‑HPLC(条件为:进样量为10μL;色谱柱为Zorbax C18(250×4.6mm,5μm);流动相为50%乙腈;洗脱速度为0.5mL/min;紫外检测波长为220nm)进行纯化,测定各分离组分的血管紧张素转化酶(ACE)半数抑制率(IC50),选择最优的组分,测定其氨基酸序列和分子量,得氨基酸序列为Trp‑Pro‑Phe‑Ala‑Cys‑Ser(WPFACS),ESI/MS检测分子量为709.8Da。

5.根据权利要求2或3中所述一种金枪鱼鱼卵降血压肽的制备,其特征在于所述的步骤

1)中的金枪鱼为鲣鱼Katsuwonus pelamis。

6.根据权利要求3所述一种金枪鱼鱼卵降血压肽的制备,其特征在于所述步骤1)中解冻除杂后的金枪鱼与蒸馏水的重量体积比g/ml为1:5。

7.根据权利要求3所述一种金枪鱼鱼卵降血压肽的制备,其特征在于所述步骤1)中冻干后的粉末与乙酸乙酯的重量体积比g/ml为1:4。

8.根据权利要求3所述一种金枪鱼鱼卵降血压肽的制备,其特征在于所述步骤2)中中性蛋白酶的添加量为金枪鱼鱼卵粉末重量的0.8%~1.5%。

9.根据权利要求3所述一种金枪鱼鱼卵降血压肽的制备,其特征在于所述步骤2)中金枪鱼鱼卵粉末与甘氨酸‑NaOH缓冲液的重量体积比g/ml为1:8。

10.如权利要求1所述一种金枪鱼鱼卵降血压肽用于制备降血压相关疾病的药物中的用途。