1.一种基于LAMP快速检测有毒蘑菇日本红菇的方法,其特征在于,包括如下步骤:提取待测样品的基因组DNA,以提取的基因组DNA为DNA模板,进行LAMP反应;
所述LAMP反应的体系为10μL,包括:1μL pH=8.8的10×ThermoPol buffer、0.4μL浓度为100mM的MgSO4、1.4μL浓度为10mM each的dNTP Mix、0.4μL浓度为8000U/mL的Bst DNA Polymerase、0.6μL浓度为8000U/mL的HNB、1μL浓度为1‑10ng/μL的DNA模板、LAMP引物,双蒸水定容;
其中LAMP引物包括:0.12μL浓度为10μM的正向内引物FIP、0.12μL浓度为10μM的10μM反向内引物BIP、1.28μL浓度为10μM的10μM正向外引物F3、1.28μL浓度为10μM的反向外引物B3和0.64μL浓度为10μM的环引物LB;碱基序列如下:FIP:5’‑AGCTGGCTTTGAGAGGAAAGCTAATGGTTTCTTGATCAAGAAGGC‑3’;
BIP:5’‑TAGTAGGGTCTACTTTGCTGATCCTATAGGTTTGCAAAAGCCCAAG‑3’;
F3:5’‑TGTCGTGATATCTTCAACCTT‑3’;
B3:5’‑AGTCTCTGACGAGACAGTT‑3’;
LB:5’‑AGCAAAAGCCTCCAAATTCCAA‑3’;
所述LAMP反应的程序为:将反应试剂添加完成后加入石蜡油进行封层,离心混匀后60‑
65℃水浴或金属浴30min~60min,然后在80℃以上孵育至少10min;
终止LAMP反应后,根据反应液颜色变化判断检测结果,若反应液呈蓝色,则表示检测结果为阳性;若反应液呈紫色,则表示检测结果为阴性;
终止LAMP反应后,根据凝胶电泳平行实验是否检出阶梯型条带判断检测结果,若检测到阶梯型条带,则表示检测结果为阳性;若未检测到阶梯型条带,则表示检测结果为阴性。