1.一种比率型光学/光声双模式荧光探针DOP‑HNO,其特征在于,其化学结构式如下:
2.一种权利要求1所述的比率型光学/光声双模式荧光探针DOP‑HNO的制备方法,其特征在于,合成路线如下:
3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,具体包括以下步骤:(1)在冰浴条件下,将三氯氧磷逐滴加入DMF和CH2Cl2的混合溶液中,再入加原料1,搅拌
10min,撤去冰浴,加热进行反应,反应完成后分离提纯得到产物2;
(2)将原料3溶解在乙腈中,再加入碘乙烷和碳酸钾,加热反应,反应后分离提纯得到产物4;
(3)将步骤(1)中得到的产物2和步骤(2)中得到的产物4溶解在正丁醇和甲苯的混合溶液中,加热反应,反应结束后加入高氯酸搅拌,接着再分离提纯得到产物5;
(4)将步骤(3)中得到的产物5溶解在无水DMF中,加入间巯基苯酚,搅拌10min,再加入氢化钠,加热反应,反应后分离提纯得到产物6;
(5)将2‑(二苯基膦基)苯甲酸溶解在二氯甲烷中,加入4‑二甲氨基吡啶和1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐,接着在15‑30℃下搅拌10‑20min,得到混合液;将步骤(4)中得到的产物6溶解于二氯甲烷中,加入上述混合液,在氮气氛下进行反应,反应完成后,进行分离提纯,即得到荧光探针DOP‑HNO。
4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,步骤(1)中DMF与CH2Cl2的体积比为1:
1,原料1与三氯氧磷的摩尔比为1:1.5;反应条件为:在氮气保护气氛下回流进行,反应温度为80‑100℃,反应时间为2‑6h;提纯时柱层析所用洗脱剂为体积比10:1的二氯甲烷/乙醚混合溶剂。
5.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,步骤(2)中原料3、碘乙烷和碳酸钾的摩尔比为1‑3:1‑3:2‑3;反应条件为:在氮气保护气氛下回流进行,反应温度为80‑100℃,反应时间为12‑18h;提纯时柱层析所用洗脱剂为体积比10:1的二氯甲烷/乙醇混合溶剂。
6.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,步骤(3)中产物2和产物4的摩尔比为
1:2,正丁醇和甲苯的体积比为7:3;反应条件为:在氮气保护气氛下回流进行,反应温度为
100‑120℃,反应时间为8‑10h;提纯时柱层析所用洗脱剂为体积比10:1的二氯甲烷/乙醇混合溶剂。
7.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,步骤(4)中产物5、间巯基苯酚和氢化钠的摩尔比为1:3:2;反应条件为:在氮气保护气氛下进行,反应温度为45‑60℃,反应时间为8‑16h;提纯时柱层析所用洗脱剂为体积比10:1的二氯甲烷/乙醇混合溶剂。
8.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,步骤(5)中产物6、2‑(二苯基膦基)苯甲酸、4‑二甲氨基吡啶和1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐的摩尔比为1‑2:
1‑2:2‑4:1‑2;反应温度为20‑30℃,反应时间为1‑3h;提纯时硅胶柱层析所用洗脱剂为体积比为10:1的二氯甲烷/乙醇混合溶剂。
9.一种如权利要求1所述的比率型光学/光声双模式荧光探针DOP‑HNO在检测HNO中的应用。
10.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,包括如下步骤:(1)将制备得到的荧光探针DOP‑HNO溶于二甲基亚砜溶剂,制成探针母液;
(2)将步骤(1)所得的探针母液加入到待测液或生物样品中;
(3)将不同当量HNO加入步骤(2)所得的探针母液的待测液中,用紫外分光光度计和荧光光谱仪观察荧光探针DOP‑HNO的紫外吸收光谱和荧光发射光谱变化,或者将生物样品细胞与荧光探针共同孵育,然后在荧光显微镜下拍摄荧光图像,从而得到细胞荧光图像,或者将本探针用于活体中检测HNO,得到动物活体荧光成像图和光声成像图。