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专利号: 2021114330365
申请人: 山西杏花村汾酒厂股份有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种清香型白酒酒醅中乳酸菌的筛选方法,其特征在于,包括以下步骤:

1)将酒醅样品放置于PBS缓冲液中,振荡,使样品与PBS缓冲液充分混合,振荡结束后静置;所述清香型白酒酒醅为清香型白酒大楂阶段发酵后期的酒醅,或采用从立醅期的清香型白酒酒醅大楂发酵后期阶段的酒醅,或采用从冷季期的清香型白酒酒醅大楂发酵后期阶段的酒醅;

‑2 ‑3 ‑4 ‑5 ‑6 ‑7

2)静置后,取步骤1)中的上清液进行稀释,依次制成10 、10 、10 、10 、10 、 10 的稀释样液;

3)吸取步骤2)中的各梯度稀释液,均匀涂布于带指示剂的MRS固体培养基上培养,置于 

37℃培养箱中培养 96 120 h;通过指示剂观察菌落颜色变化,将变绿菌落标记出来;所述~MRS固体培养基的pH为6.0,并且添加了浓度为8 μg/mL的两性霉素B;

所述带指示剂的MRS固体培养基的制备方法为:首先配制MRS固体培养基,其组成为,蛋白胨10.0 g、牛肉膏10.0 g、酵母粉5.0 g、葡萄糖20.0 g、吐温‑80 1.0 mL、柠檬酸氢二铵

2.0 g、无水乙酸钠5  .0 g、K2HPO4 2.0 g、MnSO4·H2O 0.25 g、MgSO4·7H2O 0.58 g、琼脂15 g、蒸馏水1.0 L;

其次用稀盐酸调节配置好的MRS培养基的pH至6.0,在灭菌后的凝固前液体状态的培养基中加入终浓度为8 μg/mL的两性霉素B溶液,以及1 mL溴甲酚绿指示剂;

4)挑取步骤3)中标记的变色菌落中的菌株,接种至MRS固体培养基上划线纯化,制备得到纯化后的单菌落;所述MRS固体培养基的pH为6.0,并且添加了浓度为8 μg/mL的两性霉素B;

5)将步骤4)中得到的纯化后的单菌落,接种于MRS液体培养基中,37℃培养后保藏备用;MRS液体培养基的pH为6.0,并且添加了浓度为8 μg/mL的两性霉素B。

2.根据权利要求1所述的筛选方法,其特征在于,所述步骤1)中称取酒醅样品量为10 g,PBS缓冲液体积为100 mL,采用锥形瓶,振荡时间为20 30 min。

~

3.根据权利要求2所述的筛选方法,其特征在于,所述步骤2)中上清液的稀释方式为:‑1 ‑1

吸取上清液1 mL置于9 mL无菌水试管中,得到10 的稀释液,吸取10 的稀释液1 mL置于9 ‑2 ‑2 ‑3 ‑4 ‑5mL无菌水试管中,得到10 的稀释液,按照这种方法,依次制备得到10 、10 、10 、10 、10‑6 ‑7、10 的稀释液。

4.根据权利要求3所述的筛选方法,其特征在于,所述步骤3)中,吸取的稀释液的量为

0.1 mL。

5.根据权利要求4所述的筛选方法,其特征在于,步骤3)中,所述带指示剂的MRS固体培养基中的指示剂为溴甲酚绿指示剂,所述MRS固体培养基呈绿色,用锡箔纸包裹以防止光解,每隔4 h观察平板圈出变色菌株。

6.根据权利要求5所述的筛选方法,其特征在于,步骤4)中,接种至MRS固体培养基上划线纯化的纯化方法为三线法,所述方法具体为,把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞,用接种环在平板表面上作多次由点到线的划线稀释而获得较多独立分布的单个细胞,通过反复划线分离,获得纯化后的微生物。

7.根据权利要求6所述的筛选方法,其特征在于,所述溴甲酚绿指示剂的配置方法为:取0.1 g溴甲酚绿溶于5 mL DMSO中,得到混合溶液,取1 mL混合溶液添加至MRS培养基中。

8.权利要求1 7任一项所述的清香型白酒酒醅中乳酸菌的筛选方法在乳酸菌筛选中的~应用。