1.批量测定水稻抗性淀粉含量的方法,其特征在于依次进行如下步骤:
1)、称取0.0100±0.0001g作为待测样品的米粉于容器中,加入0.4mL混合工作液(10mg/mL胰α‑淀粉酶、3U/mL AMG),混匀后,于200±20r/min、37±0.1℃恒温震荡摇床中孵育12±0.5h;
2)、在步骤1)孵育后所得物中加入0.4mL乙醇,于4±1℃混匀后离心,倒去上清液;
3)、在倒去上清液所得的沉淀物中加入0.8mL 50%乙醇,于4±1℃混匀后离心,再次倒去上清液;
4)、再重复一次步骤3),将所得沉淀烘干;
5)、烘干后的沉淀中加入一粒钢珠和0.2mL 浓度为2M的KOH溶液,碾磨60±10s后,立即置于冰上,10min后再次碾磨60±10s,再置于冰上10min;
6)、向步骤5)所得物中加入0.8mL醋酸钠缓冲液,混匀后立即加入0.01mL AMG稀释液2,混匀后置于50±2℃水浴中孵育30min,并每间隔10min摇匀一次;
7)、将步骤6)所得物于4±1℃进行离心,所得上清液作为待测液;
取0.03mL待测液加入0.9mL GOPOD试剂,混匀后,作为待测试剂;
取0.03ml马来酸钠缓冲溶液,加入0.9mL GOPOD试剂,混匀后,作为空白试剂;
待测试剂、空白试剂分别于50±2℃恒温水浴槽中孵育20min,冷却至室温后,用紫外可见分光光度计在510nm下测定,从而获得孵育后待测试剂相对于孵育后空白试剂的吸光度值;
8)、以0.03mL葡萄糖标准溶液代替上述0.03mL待测液,按照上述步骤7)所述方法,在
510nm下,测定孵育后葡萄糖标准溶液相对于孵育后空白试剂的吸光度值,得到标准曲线;
9)、将步骤7)所得的吸光度值代入步骤8)所得的标准曲线中,获得待测液中的葡萄糖浓度;
利用待测液中的葡萄糖浓度计算获得待测样品中的抗性淀粉含量。
2.根据权利要求1所述的批量测定水稻抗性淀粉含量的方法,其特征在于:所述步骤8)中:梯度标准葡萄糖溶液的浓度分别为200μg/mL、400μg/mL、600μg/mL、800μg/mL、1000μg/mL;
所得的标准曲线为y=3019.4x+21.482;
x代表吸光度;y代表葡萄糖浓度。
3.根据权利要求1或2所述的批量测定水稻抗性淀粉含量的方法,其特征在于:所述步骤9)为:
式中:葡萄糖浓度单位为μg/mL。
4.根据权利要求3所述的批量测定水稻抗性淀粉含量的方法,其特征在于:混合工作液(10mg/mL胰α‑淀粉酶、3U/mL淀粉葡糖苷酶):用100mL马来酸钠缓冲溶液溶解1g胰α‑淀粉酶,搅拌,然后加入1mL AMG稀释液1,混匀后离心10min,取上清液;
AMG稀释液1:取0.4mL AMG溶液于离心管中,用0.1M马来酸钠缓冲溶液稀释至4.4mL;
AMG稀释液2:取1mL AMG溶液于离心管中,再加入1mL 0.1M马来酸钠缓冲溶液,混匀。
5.根据权利要求4所述的批量测定水稻抗性淀粉含量的方法,其特征在于:所述步骤2)、3)、7)的离心均为:13000r/min离心8~12min。
6.根据权利要求5所述的批量测定水稻抗性淀粉含量的方法,其特征在于:所述步骤4)的烘干为于50±5℃烘干4±0.5h。
7.根据权利要求1~6任一所述的批量测定水稻抗性淀粉含量的方法,其特征在于:稻谷打磨成精米后,磨成过100目筛的细粉,干燥后,得到作为样品的米粉。