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专利号: 2021116772967
申请人: 淮阴工学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-06-18
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一类高产表面活性素的贝莱斯芽孢杆菌突变株,其特征在于,所述贝莱斯芽孢杆菌突变株以贝莱斯芽孢杆菌HCK2出发菌株,敲除或者失活菌株基因组中负调控基因RapF和/或SerA所得。

2.根据权利要求1所述的高产表面活性素的贝莱斯芽孢杆菌突变株,其特征在于,所述负调控RapF和SerA基因的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

3.根据权利要求1所述的高产表面活性素的贝莱斯芽孢杆菌突变株,其特征在于,所述贝莱斯芽孢杆菌为贝莱斯芽孢杆菌HCK2,保藏号CCTCC NO:M2019396。

4.权利要求1所述的高产表面活性素的贝莱斯芽孢杆菌突变株的构建方法,其特征在于,包括如下步骤:

(1)以RapF和SerA基因核酸序列设计引物,以贝莱斯芽孢杆菌HCK2的基因组DNA作为模板,PCR扩增得到RapF和SerA基因片段;

(2)对PCR扩增产物和质粒进行双酶切,得到酶切基因片段和线粒质粒片段,经酶连得到重组质粒pUCSCRapF和pMUTIN4SerA。

(3)将重组质粒pUCSCRapF和pMUTIN4SerA同时或者分别转入贝莱斯芽孢杆菌HCK2中,构建得到三种突变菌株贝莱斯芽孢杆菌突变株ΔRapF、贝莱斯芽孢杆菌突变株ΔSerA、贝莱斯芽孢杆菌突变株ΔRapF+SerA。

5.根据权利要求4的构建方法,其特征在于,步骤(1)所述的引物优选分别为:RapFF:5′‑TTT AAGCTT GTCAAAGATTGTATCGAGAA‑3′RapFR:5′‑TTT GGATCC TTTCATACAACTTCACACCT‑3SerAF:5′‑TTT AAGCTT CTCAGATAAGATGAGCAATG‑3′SerAR:5′‑TTT GGATCCTTCCACTTCAAACACGTCAA‑3′。

6.根据权利要求4的构建方法,其特征在于,步骤(2)所述的限制性内切酶为Hind III和BamH I,所述质粒包括pUCSC和pMUTIN4。

7.权利要求1所述高产表面活性素的贝莱斯芽孢杆菌突变株在生产表面活性素中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述贝莱斯芽孢杆菌突变株进行发酵罐发酵:将菌种活化后制备种子液,按照体积比10‑15%接种量接入新鲜的发酵培养基,开始发酵,发酵过程中控制pH稳定在7.0左右,温度维持在35‑37℃,溶氧在25‑35%之间;当培养基中的葡萄糖消耗完之后,流加的葡萄糖溶液,维持发酵培养基中的葡萄糖浓度在0.1‑5g/L;

发酵周期40‑50h。

9.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,所述发酵培养基组成为:葡萄糖10‑15g/L,谷氨酸5‑8g/L,K2HPO4 1‑3g/L,KH2PO4 1‑3g/L,KCl 1g/L,MnSO4·7H2O 500mg/L,FeSO4·

7H2O 5mg/L,CuSO4·5H2O 160mg/L,其余为水,pH 7.0。

10.一种负调控基因RapF和/或SerA在调控贝莱斯芽孢杆菌表面活性素产量中的应用。