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专利号: 2022100065814
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种马来酸顺反异构酶突变体,其特征在于,以氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示的序列为亲本序列,对亲本序列第96位和100位中的一位或两位进行取代。

2.根据权利要求1所述的马来酸顺反异构酶突变体,其特征在于,将第96位的谷氨酰胺取代谷氨酸,将第100的丙氨酸取代为甲硫氨酸。

3.编码权利要求1或2所述的马来酸顺反异构酶突变体的基因。

4.含有权利要求3所述基因的载体。

5.表达权利要求1或2所述马来酸顺反异构酶突变体或含有权利要求3所述基因的微生物细胞。

6.根据权利要求5所述的微生物细胞,其特征在于,以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、毕赤酵母为宿主细胞。

7.一种生产天冬氨酸的方法,其特征在于,利用表达权利要求1或2所述来酸顺反异构酶突变体以及天冬氨酸酶AspA的微生物细胞转化马来酸生成L‑天冬氨酸。

8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,将所述微生物细胞在培养体系中培养至OD600为0.6~0.8,加入诱导剂诱导14~16h,收集菌体;将菌体添加至以马来酸为底物的反应体系中反应4~12h。

9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述反应体系中底物浓度为3.0~4.0M,菌株OD600=5±0.5,在pH8±1、37~45℃下反应。

10.权利要求1或2所述来酸顺反异构酶突变体或权利要求5所述微生物细胞在生产含有L‑天冬氨酸和/或含有L‑天冬氨酸衍生物产品中的应用。