1.一种分离猪肌肉干细胞的方法,其特征在于,所述方法的具体步骤为:S1:选取幼猪,处死,在无菌环境下将猪解剖,除菌处理获得猪肌肉组织;
S2:将S1获得的猪肌肉组织切碎,去除脂肪和结缔组织,得到碎肌肉组织;
S3:将S2获得的碎肌肉组织置于含有抗生素和复合酶制剂的DMEM培养液中孵育消化
60‑70 min,直到达到消化终点获得消化混合物;
S4:向S3获得的消化混合物加入含有2%胎牛血清的PBS缓冲液,混合均匀,得到含有肌肉干细胞的单核细胞群悬浮液;
S5:将S4所述悬浮液过滤,离心收集沉淀;将细胞重悬,并再次通过滤网过滤,离心,弃去上清获得细胞沉淀;
S6:向S5获得的细胞沉淀中加入红细胞裂解液,混匀并冰浴,加入含有2%胎牛血清的PBS缓冲液,离心,弃去上清获得单细胞沉淀;用生长培养基重悬沉淀,获得单细胞群悬液;
S7:将S6获得的单细胞群悬液接种于培养皿静置1 2 h后,将上清接种于铺有基底胶的~培养皿中培养,贴壁细胞即为猪肌肉干细胞;
所述复合酶制剂为链霉蛋白酶和分散酶,链霉蛋白酶的工作浓度为1 mg/mL,分散酶的工作浓度为1 mg/mL;
剪碎的猪肌肉组织和复合酶制剂的质量体积比例为1:4‑1:6。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,S6所述的生长培养基为含有15% 胎牛血清和1%青霉素‑链霉素‑两性霉素B三抗溶液的DMEM培养基。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,S7中所述的培养皿中含有2‑4 mL的生长培养基。