欢迎来到知嘟嘟! 联系电话:13095918853 卖家免费入驻,海量在线求购! 卖家免费入驻,海量在线求购!
知嘟嘟
我要发布
联系电话:13095918853
知嘟嘟经纪人
收藏
专利号: 202210041651X
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-10
缴费截止日期: 暂无
价格&联系人
年费信息
委托购买

摘要:

权利要求书:

1.一种分离猪肌肉干细胞的方法,其特征在于,所述方法的具体步骤为:S1:选取幼猪,处死,在无菌环境下将猪解剖,除菌处理获得猪肌肉组织;

S2:将S1获得的猪肌肉组织切碎,去除脂肪和结缔组织,得到碎肌肉组织;

S3:将S2获得的碎肌肉组织置于含有抗生素和复合酶制剂的DMEM培养液中孵育消化

60‑70 min,直到达到消化终点获得消化混合物;

S4:向S3获得的消化混合物加入含有2%胎牛血清的PBS缓冲液,混合均匀,得到含有肌肉干细胞的单核细胞群悬浮液;

S5:将S4所述悬浮液过滤,离心收集沉淀;将细胞重悬,并再次通过滤网过滤,离心,弃去上清获得细胞沉淀;

S6:向S5获得的细胞沉淀中加入红细胞裂解液,混匀并冰浴,加入含有2%胎牛血清的PBS缓冲液,离心,弃去上清获得单细胞沉淀;用生长培养基重悬沉淀,获得单细胞群悬液;

S7:将S6获得的单细胞群悬液接种于培养皿静置1 2 h后,将上清接种于铺有基底胶的~培养皿中培养,贴壁细胞即为猪肌肉干细胞;

所述复合酶制剂为链霉蛋白酶和分散酶,链霉蛋白酶的工作浓度为1 mg/mL,分散酶的工作浓度为1 mg/mL;

剪碎的猪肌肉组织和复合酶制剂的质量体积比例为1:4‑1:6。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,S6所述的生长培养基为含有15% 胎牛血清和1%青霉素‑链霉素‑两性霉素B三抗溶液的DMEM培养基。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,S7中所述的培养皿中含有2‑4 mL的生长培养基。