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专利号: 2022100570974
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一株分泌敌草隆单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其特征在于:所述的杂交瘤细胞株为单克隆细胞株,保藏名称为单克隆细胞株;保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号;保藏日期:2021年12月21日;保藏编号:CGMCC No.NO 45019。

2.一种敌草隆单克隆抗体,其特征在于:所述的敌草隆单克隆抗体是由保藏编号为CGMCC No.NO 45019的杂交瘤细胞株分泌获得的。

3.权利要求2所述的敌草隆单克隆抗体的制备方法,其特征在于包括如下步骤:取BALB/c小鼠,腹腔注射石蜡油,再腹腔注射保藏编号为CGMCC No.NO 45019的杂交瘤细胞株,注射后收集腹水,将腹水纯化,将获得的单抗低温保存。

4.一种敌草隆半抗原,其特征在于:所述的敌草隆半抗原的结构式如式(I)所示:

5.权利要求4所述的敌草隆半抗原的制备方法,其特征在于包括如下步骤:取N‑甲基丁酸和3,4‑二氯苯异氰酸酯溶于NaOH溶液中,室温下搅拌2小时;反应完成后,过滤,弃沉淀物;在滤液中滴加浓盐酸调pH至2,溶液呈乳白色,静置过夜,弃上清制得敌草隆半抗原;

6.一种敌草隆完全抗原,其特征在于:所述的敌草隆完全抗原的结构式如式(II)所示:

7.权利要求6所述的敌草隆完全抗原的制备方法,其特征在于包括如下步骤:将权利要求5所述的敌草隆半抗原、N‑羟基琥珀酰亚胺NHS及1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐EDC溶解于无水N,N‑二甲基甲酰胺DMF中,搅拌进行反应,得到敌草隆半抗原溶液,即A液;将牛血清蛋白用碳酸盐缓冲溶液CBS稀释,得到B液;将A液加入到B液中进行反应,得到反应液;用磷酸盐缓冲液PBS透析反应液,制得敌草隆完全抗原。

8.权利要求7所述的分泌敌草隆单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法,其特征在于包括如下步骤:

(1)制备敌草隆半抗原及敌草隆完全抗原,将获得的敌草隆完全抗原制备成弗氏佐剂与不完全弗氏佐剂;

(2)将得到的弗氏佐剂通过背部皮下注射,注射进入BALB/c小鼠体内进行多次免疫,首次免疫采用完全弗氏佐剂,加强免疫采用不完全弗氏佐剂;

(3)将经过上述免疫过程的小鼠进行采血,通过间接ELISA检测小鼠血清免疫效价和免疫抑制能力,筛选出血清中敌草隆抗体含量高的获得免疫的小鼠;

(4)将筛选出的小鼠用不完全弗氏佐剂再进行最后一次加强免疫,然后通过腹腔注射进行冲刺免疫,冲刺免疫采用不含弗氏佐剂的敌草隆完全抗原进行;

(5)将进行冲击免疫后的BALB/c小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞融合,将融合的细胞通过HAT培养基培养,利用间接ELISA检测阳性细胞孔,并进一步利用间接竞争ELISA法测定阳性细胞孔的抑制效果,通过有限稀释法对有最好抑制的阳性细胞孔进行亚克隆,制得分泌敌草隆单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

9.权利要求1所述的分泌敌草隆单克隆抗体的杂交瘤细胞株或权利要求5所述的敌草隆完全抗原或权利要求7所述的分泌敌草隆单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法在制备敌草隆单克隆抗体方面的应用。

10.权利要求2所述的敌草隆单克隆抗体或权利要求3所述的敌草隆单克隆抗体的制备方法在识别敌草隆方面的应用。