1.高产L‑半胱氨酸的基因工程菌，由如下方法构建获得：

（1）以菌株E.coil CCTCC NO：M 20191026为底盘菌株，将其基因组上的hflC基因替换为融合蛋白基因hflC‑linker‑cysM，得到工程菌E.coil W3110 EYC::hflC‑cysM；所述融合蛋白基因hflC‑linker‑cysM核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；（2）将工程菌E.coil W3110 EYC::hflC‑cysM基因组上的ybbK基因替换为融合蛋白基因ybbK‑linker‑nrdH，得到工程菌E.coil W3110 EYC::hflC‑cysM::ybbK‑nrdH；所述融合蛋白基因ybbK‑linker‑nrdH核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

（3）将工程菌E.coil W3110 EYC::hflC‑cysM::ybbK‑nrdH基因组上的hflK基因替换为融合蛋白基因hflK‑linker‑cysE，得到工程菌E.coil W3110 EYC::hflC‑cysM::ybbK‑nrdH::hflK‑cysE；所述融合蛋白基因hflK‑linker‑cysE核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

（4）构建载体质粒pTrc99a‑cysE‑yeaS；所述yeaS基因GenbBank登录号为NP_416312.1；

（5）在载体质粒pTrc99a‑cysE‑yeaS的基础上，构建载体质粒pTrc99a‑cysE‑yeaS‑alaE，然后化转到工程菌E.coil W3110 EYC::hflC‑cysM::ybbK‑nrdH::hflK‑cysE中过表达基因alaE和yeaS，得到工程菌E.coil W3110 EYC::hflC‑cysM::ybbK‑nrdH::hflK‑cysE/pESE，即为所述高产L‑半胱氨酸的基因工程菌；所述alaE基因GenBank登录号为NP_

417156.1。

2.构建权利要求1所述基因工程菌的方法，所述方法包括：

（1）以菌株E.coil CCTCC NO：M 20191026为底盘菌株，应用CRISPR‑Cas9基因编辑技术，将其基因组上的hflC基因替换为融合蛋白基因hflC‑linker‑cysM，得到工程菌E.coil W3110 EYC::hflC‑cysM；所述融合蛋白基因hflC‑linker‑cysM核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

（2）应用CRISPR‑Cas9基因编辑技术，将工程菌E.coil W3110 EYC::hflC‑cysM基因组上的ybbK基因替换为融合蛋白基因ybbK‑linker‑nrdH基因，得到工程菌E.coil W3110 EYC::hflC‑cysM::ybbK‑nrdH；所述融合蛋白基因ybbK‑linker‑nrdH核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

（3）应用CRISPR‑Cas9基因编辑技术，将工程菌E.coil W3110 EYC::hflC‑cysM::ybbK‑nrdH基因组上的hflK基因替换为融合蛋白基因hflK‑linker‑cysE基因，得到工程菌E.coil W3110 EYC::hflC‑cysM::ybbK‑nrdH::hflK‑cysE；所述融合蛋白基因hflK‑linker‑cysE核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

（4）构建载体质粒pTrc99a‑cysE‑yeaS；所述yeaS基因GenbBank登录号为NP_416312.1；

（5）在载体质粒pTrc99a‑cysE‑yeaS的基础上，构建载体质粒pTrc99a‑cysE‑yeaS‑alaE，然后化转到工程菌E.coil W3110 EYC::hflC‑cysM::ybbK‑nrdH::hflK‑cysE中过表达基因alaE和yeaS，得到工程菌E.coil W3110 EYC::hflC‑cysM::ybbK‑nrdH::hflK‑cysE/pESE，即为所述高产L‑半胱氨酸的基因工程菌；所述alaE基因GenBank登录号为NP_

417156.1。

3.权利要求1所述基因工程菌在微生物发酵制备L‑半胱氨酸中的应用。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述应用为：将所述基因工程菌菌株接种于发酵培养基中，于325～37℃、200～800rpm条件下进行发酵培养，OD600＝10～30时，添加终浓度为0.1mM的IPTG，继续培养至48h，发酵结束后取发酵液上清分离纯化得到L‑半胱氨酸。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述发酵培养基组成如下：葡萄糖25 35 g/L、~

(NH4)2SO45~20 g/L、KH2PO40.5~2 g/L、Na2S2O35~20 g/L、酵母提取物1~10 g/L、Na2HPO40.5~

2 g/L、蛋白胨0.5 2 g/L，0.5 2 ml/L微量元素溶液，溶剂为去离子水，pH值自然；微量元素~ ~

溶液组成为：0.15 g/L Na2MoO4·2H2O，2.5 g/L H3BO3，0.7g/L CoCl2·6H2O，0.25g/L CuSO4·5H2O，1.6g/L MnCl2·4H2O，0.3g/L ZnSO4·7H2O，溶剂为去离子水。