1.一种羰基还原酶突变体,由SEQ ID NO.2所示氨基酸经下列突变而得:第233位甘氨酸突变为天冬酰胺。
2.编码权利要求1所述羰基还原酶突变体的基因。
3.含有权利要求2所述编码基因的载体。
4.含有权利要求2所述编码基因的基因工程菌。
5.权利要求1所述羰基还原酶突变体在生物催化制备瑞舒伐他汀手性中间体(3R,5S)‑
6‑氯‑3,5‑二羟基己酸叔丁酯中的应用。
6.如权利要求5所述的应用,其特征在于所述应用为:以含所述羰基还原酶突变体编码基因的工程菌经发酵培养获得的湿菌体或湿菌体超声破碎后提取的纯酶为催化剂,以(S)‑
6‑氯‑5‑羟基‑3‑氧代己酸叔丁酯为底物,以有机溶剂为辅助底物,于pH值为6‑8的缓冲溶液中构成反应体系,在25‑35℃、150‑600rpm条件下反应,反应完全,将反应液分离纯化,获得所述(3R,5S)‑6‑氯‑3,5‑二羟基己酸叔丁酯。
7.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述催化剂用量以湿菌体重量计为3 50g/L缓~冲溶液,所述底物的初始浓度为2 300g/L缓冲溶液,所述辅助底物体积用量为缓冲液体积~的5 70%。
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8.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述湿菌体按如下方法制备:将含有所述羰基还原酶突变体编码基因的工程菌接种至含终浓度50 μg/mL卡那霉素抗性的LB液体培养基,
37℃,200rpm下培养8h获得种子液,再以体积浓度1%接种量接种至新鲜的含有终浓度50μg/ml卡那霉素抗性的LB液体培养基中,于37℃,200rpm下培养至菌体OD600达0.6~0.8,加入终浓度为0.1mM的IPTG,28℃下诱导培养12h后,4℃、8000rpm离心15min,弃去上清液,收集获得湿菌体。