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专利号: 2022101785850
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种编码胶原蛋白的DNA分子,其特征在于,含有SEQ ID NO.9所示的核苷酸序列。

2.携带权利要求1所述DNA分子的质粒。

3.可向胞外分泌具有三股螺旋结构的胶原蛋白的谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum),其特征在于,所述谷氨酸棒杆菌表达了如所示的序列;

其中,Signal区域含SEQ ID NO.3~8任一所示序列编码的信号肽;非胶原域V‑domain的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示;胶原域B的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

4.根据权利要求3所述的谷氨酸棒杆菌,其特征在于,以pXMJ19系列质粒为表达载体。

5.一种促进谷氨酸棒杆菌向胞外分泌表达带有三股螺旋结构的胶原蛋白的方法,其特征在于,将信号肽添加至编码胶原蛋白的序列的上游;所述信号肽的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.3~8所示;所述编码胶原蛋白的序列如SEQ ID NO.9所示。

6.应用权利要求3或4所述谷氨酸棒杆菌生产胶原蛋白的方法,其特征在于,将所述谷氨酸棒杆菌接种至发酵培养基中,在27~28.5℃培养24~64h。

7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述方法还包括(a)~(d)的至少一项操作:

(a)培养至发酵液OD600为2~14时用IPTG进行诱导;

(b)以终浓度0.2~1.1mmol/L加入IPTG诱导;

(c)在27~28.5℃用IPTG诱导24~64h;

(d)提高发酵过程的溶氧。

8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,所述提高发酵过程的溶氧包括:在含挡板的容器中发酵,和/或控制发酵培养基的装液量为发酵容器容积的10~20%。

9.根据权利要求6~8任一所述的方法,其特征在于,用于发酵的培养基按g/L计含有:(NH4)2SO4 20,玉米浆干粉20,K2HPO4 1,KH2PO4 1,MgSO4 0.25,3‑(N‑吗啉基)丙磺酸钠盐

42,葡萄糖20。

10.权利要求1所述的DNA分子,或权利要求2所述的质粒,或权利要求3~4任一所述的谷氨酸棒杆菌,或权利要求5~9任一所述的方法在生物、食品、化工领域制备胶原蛋白,或在生物医学材料、组织工程或化妆品领域中的应用。