1.一种基于苯丙氨酸-铜离子配位聚合物的H
(1)L-Phe-Cu(II)CPs的制备
依次取0.1~1mL浓度为1~25μM的L-苯丙氨酸L-Phe溶液,0.1~1mL浓度为10~250μM的五水硫酸铜溶液混合成0.1~2mL的溶液,将其在室温下剧烈振荡5~15min,即得到L-Phe-Cu(II)CPs;
(2)电化学生物传感器的制备
a.Au:将金电极在麂皮上依次用1、0.3和0.05μm的氧化铝粉末抛光打磨1~5min,之后再依次用水、乙醇超声洗涤1~5min,然后用氮气吹干备用,该电极标记为Au;
b.CB[7]/Au:将Au浸入0.1~0.2mL浓度为0.1~2mM的葫芦脲[7]CB[7]水溶液中10~15h,然后用超纯水缓缓冲洗电极以去除未结合的CB[7],该电极标记为CB[7]/Au;
c.CPs/CB[7]/Au:随后取5~10μL步骤(1)中合成的L-Phe-Cu(II)CPs滴加在CB[7]/Au表面,于室温下静置0.1~2h,用超纯水缓缓冲洗电极以去除未结合的CPs,该电极标记为CPs/CB[7]/Au;随后利用电化学循环伏安法进行测试,设置电位范围为-1.2~0V、扫速0.05~0.1V/s,使用含有一定浓度HH
在步骤(2)中c步骤,改变H
PPi分析检测:
在步骤(1)中,依次将0.05~0.1mL的终浓度为0~0.2mM的PPi,0.02~0.05mL的终浓度为0~0.4mM的Cu(II)溶液,混合后反应0.1~2h,再将0.02~0.05mL的终浓度为0~0.05mM的L-Phe加入并振荡5~15min,加蒸馏水配成总体积为100~200μL的溶液;步骤(1)和(2)中其他实验步骤维持不变,基于此能够得到一系列PPi传感器,并应用于PPi传感分析;
ALP分析检测:
在步骤(1)中,依次将5~10μL的终浓度为0~50mU/mL的ALP;5~10μL的终浓度为0~0.2mM的PPi,5~10μL的终浓度为0~0.4mM的Cu(II)溶液,5~10μL的终浓度为0~0.1mM的Mg(II)溶液,5~10μL的1mM,pH=7.4的Tris-HCl缓冲液混合,剧烈振荡1~5min使溶液混合均匀,将上述溶液在25~50℃下孵育1~6h后置于80~100℃水浴使酶失活,冷却至室温;随后在上述混合溶液中加入5~10μL的终浓度为0~0.05mM的L-Phe,加蒸馏水配成50~100μL的溶液,混合均匀后置于25~50℃下孵育5~15min,并在4℃冰箱冷藏保存;步骤(1)和(2)中其他实验步骤维持不变,基于此能够得到一系列ALP传感器,并应用于ALP传感分析;
Na
在步骤(1)中,将10μL终浓度为0~150μM的抑制剂Na
2.根据权利要求1所述的电化学分析方法,其特征在于,所述含有一定浓度H
3.根据权利要求1所述的电化学分析方法,其特征在于,传感器对H
4.根据权利要求1所述的电化学分析方法,其特征在于,传感器对PPi的电流响应与浓度呈良好的线性关系,电流响应对浓度的线性相关方程为y=-0.54C
5.根据权利要求1所述的电化学分析方法,其特征在于,传感器对ALP的电流响应与浓度呈良好的线性关系,电流响应对ALP浓度线性相关方程为y=1.36C
6.根据权利要求1所述的电化学分析方法,其特征在于,Na