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专利号: 202210357861X
申请人: 深圳万知达科技有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-08-27
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于超顺磁性二维材料的低场核磁共振均相免疫检测食源性致病菌的方法,本方法不以诊断或治疗为目的,其特征在于包括以下步骤:(1)功能化超顺磁性二维材料GO@SPIONs&Ab的合成

A.将0.5‑1.5 mg/mL 氧化石墨烯分散液15‑25 mL于12000 rpm离心5 min后,弃去上清液,重新分散在15‑25mL无水乙醇中超声6 min后,加入15‑25 µL 浓度为0.0426 M 3‑氨丙基三乙氧基硅烷溶液,并在65‑75℃磁力搅拌3‑5 h,用乙醇和水反复洗涤后,分散在20ml的水中,即得到氨基化的单层氧化石墨烯分散液;

B.将1‑3 mL 25 wt%的戊二醛溶液加入到8‑12 mL NH2‑GO分散液中,室温下磁力搅拌2‑

5 h后,5000 rpm离心并用乙醇清洗后,分散在8‑12mL水中,向分散液中加入150 ‑250µL 

0.5 mg/mL 超顺磁性纳米氧化铁粒子和150 ‑250µL 100 µg/mL食源性致病菌多克隆抗体溶液,振荡4 h后得到功能化的GO@SPIONs&Ab,再加入150‑250 µL 2 wt% 牛血清蛋白溶液以封闭非特异性结合位点,并用pH=7.4,0.01 M的PBS溶液洗涤以除去未键合的BSA与Ab后,分散在2 mL PBS溶液中,1737 ×g离心3 min除去游离的SPIONs,最后将所得的产物分散在

10 mL PBS溶液中,即得到功能化超顺磁性二维材料GO@SPIONs&Ab分散液;

(2) 食源性致病菌的低场核磁共振均相免疫检测

取0.1 mLGO@SPIONs&Ab分散液和1.0‑1.4 mL 含不同浓度食源性致病菌的待测样品加入到样品瓶中混合,振摇孵育30 min,置于低场核磁共振造影剂驰豫分析仪中,在35℃下采集T2,使用CPMG脉冲序列测量测定一系列不同浓度的食源性致病菌对应的水质子的横向驰豫时间差值ΔT2,建立水质子的横向驰豫时间差值与食源性致病菌浓度之间的定量关系,根据该定量关系即可测定未知样品中食源性致病菌浓度。

2.根据权利要求1所述的一种基于超顺磁性二维材料的低场核磁共振均相免疫检测食源性致病菌的方法,本方法不以诊断或治疗为目的,其特征在于步骤(2)测量参数如下:主频19.00 MHz,回波个数18000,回波时间0.6 ms,累加次数2次,等待时间5000 ms,数字增益

3,模拟增益15.0 dB。

3.根据权利要求1所述的一种基于超顺磁性二维材料的低场核磁共振均相免疫检测食源性致病菌的方法,本方法不以诊断或治疗为目的,其特征在于步骤(2)中所述的ΔT2的值由以下公式计算:ΔT2 = T2N– T2P,其中T2为水质子的横向驰豫时间,T2N 是无食源性致病菌时的平均T2,T2P是有食源性致病菌时的平均T2。

4.根据权利要求1所述的一种基于超顺磁性二维材料的低场核磁共振均相免疫检测食源性致病菌的方法,本方法不以诊断或治疗为目的,其特征在于:所述的食源性致病菌包括副溶血性弧菌、创伤弧菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌。