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专利号: 2022103831092
申请人: 重庆文理学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 医学或兽医学;卫生学
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种逆转非小细胞肺癌对厄洛替尼获得性耐药的基因药物,其特征在于:所述基因药物为携带LMNA基因的病毒载体,所述LMNA基因序列为SEQ  ID  NO.1  所示,所述LMNA基因受CMV启动子的调控。2.如权利要求1所述的基因药物,其特征在于:所述病毒载体为pLVX‑Puro载体。3.  LMNA基因在制备用于逆转非小细胞肺癌对厄洛替尼耐药性的药物中的应用。4.如权利要求3所述的应用,其特征在于:所述LMNA基因序列为SEQ  ID  NO.1  所示。5.如权利要求3或4所述的应用,其特征在于:所述LMNA基因受CMV启动子的调控。6.如权利要求4或5所述的应用,其特征在于:所述LMNA基因是与病毒载体相连,所述病毒载体为pLVX‑Puro载体。7.如权利要求1或2所述基因药物的构建方法,其特征在于,按如下步骤进行:所述基因药物的构建主要包括病毒载体LMNA的构建。8.如权利要求书7所述基因药物的构建方法,其特征在于:所述病毒载体LMNA的构建按以下步骤:根据LMNA基因,核苷酸序列如SEQ  ID  NO.1序列设计引物,上游引物LMNA‑F  核苷酸序列如SEQ  ID  NO.2,下游引物LMNA‑R,核苷酸序列如SEQ  ID  NO.3;通过PCR扩增方式将酶切位点引入LMNA基因两端,PCR条件为:95℃  预变性5min;95℃变性30s、58℃退火30s、72℃延伸2min,共35个循环;  72℃  终延伸5min;同时对LMNA基因片段和pLVX‑Puro载体进行XhoI和BamHI双酶切,回收LMNA基因片段和pLVX‑Puro载体片段,两片段连接后转化E .coli  DH5α感受态细胞,筛选、测序鉴定获得pLVX‑Puro‑LMNA载体;应用宝生物公司三质粒包装系统(pMD.2G、psPAX2、pLVX‑Puro‑LMNA)制备慢病毒,将HEK293T细胞培养在100mm皿中,待细胞长到60‑70%时可进行转染;转染体系为:取1ml  DMEM无血清培养基加入2.5μg  pMD.2G、7.5μg  psPAX2、10μg  pLVX‑Puro‑LMNA,混匀后加入20μl PEI (2mg/ml)溶液,与质粒载体混匀,室温静置5min,缓慢滴加到培养皿中,十字交叉混匀;培养箱中培养48h,吸取上清,4000rpm离心5min,取上清,制得病毒载体LMNA。