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专利号: 2022104375241
申请人: 陕西科技大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-02-23
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种蛋白质含量的热荧光分析检测方法,其特征在于:包括以下步骤:

1)样品制备:将可以和蛋白质特异性结合的适配体序列与目标蛋白标准溶液或含有目标蛋白的复杂样本混匀;

2)熔解分析:通过熔解对步骤1)制备的样品进行分析,得到原始熔解曲线、一阶求导曲线以及熔解温度;

3)定量:读取熔解峰的熔解温度,根据蛋白质的浓度‑熔解温度计算待测样品中目标蛋白的含量。

2.根据权利要求1所述的一种蛋白质含量的热荧光分析检测方法,其特征在于:适配体序列包括TB序列,TB序列源自已经筛选出的可以和TB特异性结合的寡核苷酸序列5`‑AGT CCG TGG TAG GGC AGG TTG GGG TGA CT‑3`、5`‑GGTAGGGCAGGTTGG‑3`。

3.根据权利要求1所述的一种蛋白质含量的热荧光分析检测方法,其特征在于:适配体序列包括PDGF‑BB序列,PDGF‑BB序列源自已经筛选出的可以和PDGF‑BB特异性结合的寡核苷酸序列5`‑CAG GCT ACG GCA CGT AGA GCA TCA CCA TGA TCC TG‑3`、5`‑AGGGCGCGTTCTTCGTGGTTACTTTTAGTCCCG‑3`、5`‑GGC GCA CCC AAC TCA AAA AAA TAC TCA GGG CAC TGC AAG CAA TTG TGG TCC CAA TGGGCT GAG TAT‑3`。

4.根据权利要求1所述的一种蛋白质含量的热荧光分析检测方法,其特征在于:适配体序列包括乳铁蛋白序列,乳铁蛋白序列源自已经筛选出的可以和PDGF‑BB特异性结合的寡核苷酸序列5`‑CAG GCT ACG GCA CGT AGA GCA TCA CCA TGA TCC TG‑3`、5`‑AGGGCGCGTTCTTCGTGGTTACTTTTAGTCCCG‑3`、5`‑GGC GCA CCC AAC TCA AAA AAA TAC TCA GGG CAC TGC AAG CAA TTG TGG TCC CAA TGGGCT GAG TAT‑3`。

5.根据权利要求1所述的一种蛋白质含量的热荧光分析检测方法,其特征在于:适配体序列采用不同荧光基团标记,选用不同的染料通道进行分析,实现蛋白质的双重检测。

6.根据权利要求1所述的一种蛋白质含量的热荧光分析检测方法,其特征在于:热荧光分析检测参数为:扫描温度范围:37‑97℃,升温速率为0.05℃/s。LF检测选用FAM荧光通道,TB检测选用ROX荧光通道,PDGF‑BB选用HEX荧光通道。

7.根据权利要求2所述的一种蛋白质含量的热荧光分析检测方法,其特征在于:对所用的TB结合的DNA序列进行标记,标记一个ROX荧光基团,一个BHQ2猝灭基团,且标记基团在任意的T碱基位置。

8.根据权利要求3所述的一种蛋白质含量的热荧光分析检测方法,其特征在于:对所用的PDGF‑BB结合的DNA序列进行标记,标记一个HEX荧光基团,一个BHQ2猝灭基团,且标记基团在任意的T碱基位置。

9.根据权利要求4所述的一种蛋白质含量的热荧光分析检测方法,其特征在于:对所用的LF结合的DNA序列进行标记,标记一个FAM荧光基团,一个BHQ1猝灭基团,且标记基团在任意的T碱基位置。

10.一种蛋白质含量的热荧光分析检测试剂盒,其特征在于:该试剂盒包含各类蛋白标准品、适配体序列以及结合缓冲液。