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专利号: 2022104399532
申请人: 扬州市职业大学(扬州开放大学)
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-06-26
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种预防和治疗帕金森氏病的组合物的制备方法,其特征在于,将蓝莓提取物加入培养基后,用于第一次发酵培养丁酸梭菌、嗜酸乳杆菌、发酵乳杆菌和乳双歧杆菌JYBR‑

190,然后加入蝉衣、山茱萸、羚羊角的酶解产物,进行第二次发酵培养,得到的益生菌发酵中药组合物与抗氧化组合物、益生元、短链脂肪酸混合均匀,得到预防和治疗帕金森氏病的组合物。

2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

S1.蓝莓提取物的制备:将蓝莓洗净,干燥至足干后,粉碎,加入水中,微波加热提取,过滤,浓缩,冷冻干燥,得到蓝莓提取物;

S2.培养基的制备:将步骤S1制得的蓝莓提取物、碳源、可溶性氮源、维生素、无机盐用无菌水溶解,用PBS溶液调节培养基pH值,灭菌备用;

S3.菌种种子液的制备:将丁酸梭菌、嗜酸乳杆菌、发酵乳杆菌和乳双歧杆菌JYBR‑190分别接种到高氏培养基中,分别培养成菌种种子液;

S4.发酵组合物的制备:将步骤S3制得的菌种种子液分别接种到步骤S2制得的培养基中进行第一次发酵培养,得到发酵组合物;

S5.中药酶解组合物的制备:将蝉衣、山茱萸、羚羊角分别洗净,干燥,打粉后,加入水中,加入复合酶酶解,灭酶,过滤,滤液冷冻干燥,得到中药酶解组合物;

S6.第二次发酵:向步骤S4中的发酵组合物中加入步骤S5中制得的中药酶解组合物,搅拌混合均匀后,进行第二次发酵培养,得到益生菌发酵中药组合物;

S7.抗氧化组合物的制备:将姜黄素和维生素C混合后,研细,过筛,得到抗氧化组合物;

S8.益生元的制备:将阿拉伯糖和菊粉混合后,研细,过筛,得到益生元;

S9.短链脂肪酸的制备:将α‑硫辛酸和丁酸盐混合后,研细,过筛,得到短链脂肪酸;

S10.预防和治疗帕金森氏病的组合物的制备:将步骤S6制得的益生菌发酵中药组合物、步骤S7制得的抗氧化组合物、步骤S8制得的益生元、步骤S9制得的短链脂肪酸混合均匀,得到预防和治疗帕金森氏病的组合物。

3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤S1中所述微波加热提取的条件为

1000‑2000W功率下,加热至70‑90℃,提取2‑4h;步骤S2中所述蓝莓提取物、碳源、可溶性氮源、维生素、无机盐和无菌水的质量比为(5‑7):(7‑12):(2‑5):(0.5‑1):(0.1‑2):100;所述pH值调节至6.7‑7.2。

4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,所述碳源选自菊粉、糖蜜、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、果糖、水溶性淀粉中的至少一种;所述可溶性氮源选自硝酸盐、铵盐、尿素、氨基酸中的至少一种;所述氨基酸选自苯丙氨酸、丝氨酸、赖氨酸、苏氨酸、甘氨酸、缬氨酸、色氨酸、亮氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸中的至少一种;所述硝酸盐选自硝酸钠、硝酸钾、硝酸钙中的至少一种;所述铵盐选自氯化钠、硫酸钠、硝酸铵中的至少一种;所述维生素选自泛酸、叶酸、维生素C、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素A、维生素K、维生素B12、维生素D、维生素E中的至一种;所述无机盐选自氯化钠、氯化钾、硫酸钾、硫酸钠、氯化钙、氯化镁、硫酸镁、硫酸铁、氯化铁、氯化亚铁、硫酸亚铁、氯化锌、硫酸锌、氯化铜、硫酸铜、氯化锰、硫酸锰中的至少一种。

5.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤S3中所述丁酸梭菌、嗜酸乳杆菌、发酵乳杆菌和乳双歧杆菌JYBR‑190的质量比为(3‑5):(1‑2):(2‑3):(2‑4);所述培养的条

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件为35‑40℃,培养时间为18‑24h;所述菌种种子液中含菌量为10‑10cfu/mL;步骤S4中所述各种菌种种子液的接种量均为3‑5%;所述第一次发酵培养的条件为36‑38℃,培养36‑

60h。

6.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤S5中所述蝉衣、山茱萸、羚羊角的质量比为(5‑7):(2‑4):(3‑5);所述复合酶为纤维素酶和蛋白酶的组合物,质量比为(2‑5):

7;所述蛋白酶选自木瓜蛋白酶、无花果蛋白酶、菠萝蛋白酶、胰蛋白酶中的至一种;步骤S6中所述发酵组合物和中药酶解组合物的质量比为10:(3‑5);所述第二次发酵培养的条件为

36‑38℃,培养48‑72h。

7.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤S7中所述姜黄素和维生素C的质量比为(3‑5):2;步骤S8中所述阿拉伯糖和菊粉的质量比为(5‑7):3;步骤S9中所述α‑硫辛酸和丁酸盐的质量比为(1‑3):5;所述丁酸盐选自丁酸钠、丁酸钾、丁酸钙中的至少一种。

8.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤S10中所述益生菌发酵中药组合物、抗氧化组合物、益生元、短链脂肪酸的质量比为(10‑15):(2‑5):(1‑4):(2‑5)。

9.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,具体包括以下步骤:

S1.蓝莓提取物的制备:将蓝莓洗净,干燥至足干后,粉碎,加入水中,1000‑2000W功率下,微波加热至70‑90℃,提取2‑4h,过滤,浓缩,冷冻干燥,得到蓝莓提取物;

S2.培养基的制备:将5‑7重量份步骤S1制得的蓝莓提取物、7‑12重量份碳源、2‑5重量份可溶性氮源、0.5‑1重量份维生素、0.1‑2重量份无机盐用100重量份无菌水溶解,用PBS溶液调节培养基pH值至6.7‑7.2,紫外线灭菌备用;

S3.菌种种子液的制备:将3‑5重量份丁酸梭菌、1‑2重量份嗜酸乳杆菌、2‑3重量份发酵乳杆菌和2‑4重量份乳双歧杆菌JYBR‑190分别接种到高氏培养基中,分别培养成菌种种子

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液,所述菌种种子液中含菌量为10‑10cfu/mL;

S4.发酵组合物的制备:将步骤S3制得的菌种种子液分别接种到步骤S2制得的培养基中,各种菌种种子液的接种量均为3‑5%,36‑38℃温度下进行第一次发酵培养36‑60h,得到发酵组合物;

S5.中药酶解组合物的制备:将5‑7重量份蝉衣、2‑4重量份山茱萸、3‑5重量份羚羊角分别洗净,干燥,打粉后,加入水中,加入复合酶酶解,105‑110℃灭酶15‑20min,过滤,滤液冷冻干燥,得到中药酶解组合物;所述复合酶为纤维素酶和蛋白酶的组合物,质量比为(2‑5):

7;

S6.第二次发酵:向10重量份步骤S4中的发酵组合物中加入3‑5重量份步骤S5中制得的中药酶解组合物,搅拌混合均匀后,36‑38℃温度下,进行第二次发酵培养48‑72h,得到益生菌发酵中药组合物;

S7.抗氧化组合物的制备:将3‑5重量份姜黄素和2重量份维生素C混合后,研细,过筛,得到抗氧化组合物;

S8.益生元的制备:将5‑7重量份阿拉伯糖和3重量份菊粉混合后,研细,过筛,得到益生元;

S9.短链脂肪酸的制备:将1‑3重量份重量份α‑硫辛酸和5重量份丁酸盐混合后,研细,过筛,得到短链脂肪酸;

S10.预防和治疗帕金森氏病的组合物的制备:将10‑15重量份步骤S6制得的益生菌发酵中药组合物、2‑5重量份步骤S7制得的抗氧化组合物、1‑4重量份步骤S8制得的益生元、2‑

5重量份步骤S9制得的短链脂肪酸混合均匀,得到预防和治疗帕金森氏病的组合物。

10.一种如权利要求1‑9任一项所述的制备方法制得的预防和治疗帕金森氏病的组合物。