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专利号: 2022104982761
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2023-10-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种化学合成幽门螺旋杆菌脂多糖核心寡糖抗原糖链的方法,其特征在于,通过式2~9所示的八个单糖砌块化合物合成式1所示的幽门螺旋杆菌脂多糖核心十一糖抗原;

其中,PG2,PG6,PG8,PG9,PG12,PG13,PG14,PG15,PG17,PG18,PG19,PG22,PG23,PG25,PG26,PG28,PG29,PG30,PG34,PG35,PG36为氢(H)、苄基(Bn)及其衍生物、2‑萘甲基及其衍生物或叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或三乙基硅烷基;

PG1为氢、甲基、乙基、叔丁基或苄基中任意一种;

PG4,PG5为丙叉基、苄叉基、苄基及其衍生物、2‑萘甲基及其衍生物、或叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基或三乙基硅烷基中任意一种;

PG7,PG11,PG16,PG21,PG27,PG32,PG33,PG38为乙酰基、氯乙酰基、苯甲酰基、新戊酰基、乙酰丙酰基,9‑戊甲氧汤基、2‑萘甲基(Nap)及其衍生物、2‑对甲氧基苄基;

PG10为乙酰基、氯乙酰基、苯甲酰基、新戊酰基、乙酰丙酰基或9‑戊甲氧汤基中的一种;

Linker为‑(CH2)n‑N‑Y1Y2或者‑(CH2)n‑S‑Y1,其中n=1~10,Y1,Y2为氢、酰基、苄基及其衍生物、2‑萘甲基或苄甲氧羰基任意一种;

LG为离去基团,选自卤素、三氯乙酰亚胺酯、N‑苯基三氟乙酰亚胺酯糖苷、甲硫基、乙硫基、苯硫基、对甲苯硫基、二苄基磷酸酯基任意一种。

2.根据权利要求1所述方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)通过糖砌块供体3和糖砌块受体2进行糖基化反应,得到二糖化合物11,合成路线如下所示:

(2)二糖11选择性的脱除PG7保护基,得到二糖12;二糖12在促进剂的作用下与糖砌块供体4进行糖基化反应,得到三糖化合物13;合成路线如下所示:(3)三糖化合物13选择性的脱除PG11保护基,得到三糖14;三糖14在促进剂的作用下与糖砌块供体5进行糖基化反应,得到四糖化合物15;合成路线如下所示:(4)四糖15选择性的脱除PG16保护基,得到四糖16;四糖16在促进剂的作用下与糖砌块供体6进行糖基化反应,得到五糖化合物17;合成路线如下所示:(5)糖砌块供体7与糖砌块受体9在促进剂的催化作用下进行糖基化反应,制备得到二糖18;化合物18选择性脱去PG29得到二糖19,化合物19在促进剂的催化作用下与糖砌块供体

7继续进行糖基化反应,得到三糖模块20;三糖模块20的端基位经脱除PG38后,在碱性催化剂的作用下,端基位羟基与三氯乙腈或者苯基三氟乙酰氯反应得到三糖供体21;合成路线如下所示:(6)五糖化合物17选择性的脱除PG21保护基,得到五糖22;五糖22在促进剂的作用下与三糖供体21进行糖基化反应,得到八糖化合物23;合成路线如下所示:(7)糖基供体7与受体24在促进剂的催化作用下进行糖基化反应,制备得到二糖25;化合物25选择性脱去PG38,在碱性催化剂的作用下,端基位羟基与三氯乙腈或者苯基三氟乙酰氯反应得到二糖受体26;合成路线如下所示:(8)八糖23选择性的脱除PG20保护基,得到八糖27;八糖27在促进剂的作用下与单糖供体8进行糖基化反应,得到九糖化合物28;九糖28选择性脱去保护基PG32得到九糖受体29,在促进剂的作用下与糖基供体26进行糖基化反应,得到十一糖30;合成路线如下所示:(9)十一糖30在碱性条件下脱去酰基保护基,在钯碳/氢气条件下脱去芳香保护基,完成脱保护,得到全脱保护的式1所示的幽门螺旋杆菌脂多糖核心十一糖抗原。

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤(2)中糖砌块供体4和二糖12的摩尔比为(1~2):1;糖基化反应条件为:将糖基供体和糖基受体溶于二氯甲烷中,加入分子筛和活化试剂,反应温度为‑10℃~0℃,反应时间为3‑7h。

4.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤(3)中供体5和三糖14的摩尔比为(1~

2):1;糖基化反应条件为:将糖基供体和糖基受体溶于二氯甲烷中,加入分子筛和活化试剂,反应温度为‑20℃~0℃,反应时间为3‑7h。

5.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤(4)中糖砌块供体6和四糖16的摩尔比为(1~2):1;糖基化反应条件为:将糖基供体和糖基受体溶于二氯甲烷中,加入分子筛和活化试剂,反应温度为‑20℃~0℃,反应时间为3‑7h。

6.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤(6)中糖砌块供体21和受体22的摩尔比为(1~2):1;糖基化反应条件为:将糖基供体和糖基受体溶于二氯甲烷和乙醚(1:3)中,加入分子筛和活化试剂,反应温度为0℃~室温,反应时间为3‑7h。

7.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤(8)中糖砌块供体和受体的摩尔比为(2~5):1;糖基化反应条件为:将糖基供体和糖基受体溶于二氯甲烷和乙醚(1:3)中,加入分子筛和活化试剂,反应温度为0℃~室温,反应时间为3‑7h。

8.权利要求1‑7任一项所述方法合成得到的一种组装有连接臂的幽门螺旋杆菌核心抗原类寡糖化合物,结构如权利要求1中式1所示。

9.一种幽门螺旋杆菌糖抗原片段芯片,其特征在于,利用权利要求8所述的组装有连接臂的幽门螺旋杆菌核心抗原类寡糖化合物通过连接臂与芯片通过共价键结合制得。

10.一种制备幽门螺旋杆菌糖蛋白缀合物的方法,其特征在于,权利要求8所述的组装有连接臂的幽门螺旋杆菌核心抗原类寡糖化合物通过连接臂与载体蛋白连接,制备得到糖蛋白缀合物,其通式可表示为糖‑Linker‑载体蛋白;载体蛋白包括白喉毒素无毒突变蛋白,血蓝蛋白、牛血清蛋白、脑膜炎炎外膜蛋白,破伤风类毒素或者白喉类毒素中的一种。