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专利号: 2022105142588
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种重组氧化葡萄糖酸杆菌,其特征在于,能够以葡萄糖为底物一步发酵合成2‑酮基‑L‑古龙酸;所述重组氧化葡萄糖酸杆菌在出发菌株的基础上,敲除或缺失了醛酮还原酶基因bdhAB,并进行了(1)或(2)的改进:(1)过表达氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)来源的2,5‑二酮基‑D‑葡萄糖酸还原酶;

(2)过表达氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans)来源的2,5‑二酮基‑D‑葡萄糖酸还原酶,并表达柠檬塔特姆氏菌(Tatumella citrea)来源的2,5‑二酮基‑D‑葡萄糖酸转运蛋白;

所述出发菌株为氧化葡萄糖酸杆菌ATCC9937;表达2,5‑二酮基‑D‑葡萄糖酸还原酶和/或2,5‑二酮基‑D‑葡萄糖酸转运蛋白的载体为pBBRMCS2;所述醛酮还原酶基因bdhAB的基因序列如SEQ ID NO.4所示;所述2,5‑二酮基‑D‑葡萄糖酸还原酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示;所述2,5‑二酮基‑D‑葡萄糖酸转运蛋白的氨基酸序列如Genbank登录号:WP_

087487376.1所示。

2.根据权利要求1所述的重组氧化葡萄糖酸杆菌,其特征在于,所述2,5‑二酮基‑D‑葡萄糖酸还原酶的编码基因通过启动子P7起始转录。

3.根据权利要求1或2所述的重组氧化葡萄糖酸杆菌,其特征在于,所述2,5‑二酮基‑D‑葡萄糖酸转运蛋白的编码基因通过启动子P15起始转录。

4.一种提高氧化葡萄糖酸杆菌2‑酮基‑L‑古龙酸产量的方法,其特征在于,过表达氧化葡萄糖酸杆菌来源的2,5‑二酮基‑D‑葡萄糖酸还原酶,表达柠檬塔特姆氏菌来源的2,5‑二酮基‑D‑葡萄糖酸转运蛋白,并敲除醛酮还原酶基因bdhAB;

出发菌株为氧化葡萄糖酸杆菌ATCC9937;表达2,5‑二酮基‑D‑葡萄糖酸还原酶和/或2,

5‑二酮基‑D‑葡萄糖酸转运蛋白的载体为pBBRMCS2;所述醛酮还原酶基因bdhAB的基因序列如SEQ ID NO.4所示;所述2,5‑二酮基‑D‑葡萄糖酸还原酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示;所述2,5‑二酮基‑D‑葡萄糖酸转运蛋白的氨基酸序列如Genbank登录号:WP_

087487376.1所示。

5.应用权利要求1 3任一所述重组氧化葡萄糖酸杆菌生产2‑酮基‑L‑古龙酸的方法,其~特征在于,以葡萄糖为底物,在28 30℃发酵至少96小时。

~

6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,将所述重组氧化葡萄糖酸杆菌在含山梨醇的培养基中培养一段时间,获得种子液,再将种子液转移至发酵培养基中发酵。

7.根据权利要求5或6所述的方法,其特征在于,用于发酵的培养基含有葡萄糖、酵母粉和MgSO4。

8.权利要求1 3任一所述的重组氧化葡萄糖酸杆菌或权利要求4 7任一所述方法在制~ ~备含有2‑酮基‑L‑古龙酸或维生素C的产品中的应用。