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专利号: 2022105642729
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.青霉菌(Penicillium sp.)W21C371,保藏在中国典型培养物保藏中心,保藏日期为

2022年1月13日,保藏编号为CCTCC NO:M 2022063,地址为中国,武汉,武汉大学。

2.一种权利要求1所述的青霉菌W21C371在发酵制备弯孢霉菌素中的应用。

3.如权利要求2所述的应用,其特征在于,所述弯孢霉菌素按如下步骤制备:(1)将青霉菌W21C371接种至大米固体培养基,在20‑30℃条件下暗培养15‑30天,获得大米发酵产物;

所述大米固体培养基为大米和蒸馏水的混合物,其中蒸馏水用量以大米质量计为1‑5mL/g;

(2)将大米发酵产物中加入有机溶剂,室温浸提,提取液浓缩至无液体流出,获得粗提物浸膏;(3)将步骤(2)粗提物浸膏用水悬浮,以有机溶剂萃取,收集有机相,减压浓缩至干,得到萃取物浸膏;(4)将步骤(3)萃取物浸膏用甲醇溶解后进行MCI CHP20P柱层析,以体积浓度

20‑100%甲醇‑水为洗脱液,收集体积浓度70%的甲醇‑水洗脱部位,减压浓缩至干,得浓缩物;(5)将步骤(4)所得浓缩物用甲醇溶解后进行硅胶柱层析,以体积比为50:1、40:1、30:1的二氯甲烷‑甲醇混合溶剂进行梯度洗脱,收集体积比40:1的二氯甲烷‑甲醇洗脱部位,减压浓缩至干,即得到式(Ⅰ)所示弯孢霉菌素;

4.如权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(1)所述青霉菌W21C371接种至大米固体培养基前,先进行活化培养,再将活化后的菌悬液以体积浓度0.1‑1%的接种量接种大米固体培养基,所述活化是指将青霉菌W21C371接种至PDA培养基,28℃培养,使菌株活化,将活化后的菌株用体积浓度2%吐温80无菌水重悬,得到菌悬液。

5.如权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(1)中发酵培养条件为:28℃条件下暗培养20天。

6.如权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(2)中所述有机溶剂为95%乙醇、甲醇或丙酮;所述有机溶剂体积用量以大米固体培养基中大米干重计为2‑8mL/g。

7.如权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(2)所述浸提至少进行3次,每次提取时间为3~5天。

8.如权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(3)中所述水体积用量以粗提物浸膏重量计为2‑5mL/g;所述有机溶剂为乙酸乙酯,所述有机溶剂与水的体积比为1:0.5‑3;萃取3‑

5次。

9.如权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(4)方法为:萃取物浸膏以甲醇溶解后进行MCI CHP20P柱层析,依次以体积比为20:80、30:70、40:60、50:50、60:40、70:30、80:20、

90:10和100:0的甲醇/水混合溶剂为洗脱剂进行梯度洗脱,每一梯度洗脱2~5个柱体积,流速10‑20mL/min;收集体积比70:30的甲醇‑水洗脱部位,减压浓缩至干,得浓缩物。

10.如权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(5)方法为:将步骤(4)所得浓缩物用甲醇溶解后进行硅胶柱层析,依次以体积比为50:1、40:1、30:1的二氯甲烷‑甲醇混合溶剂为洗脱剂进行梯度洗脱,每一梯度洗脱2~5个柱体积,流速10‑20mL/min;收集体积比40:1的二氯甲烷‑甲醇洗脱部位,减压浓缩至干,即得弯孢霉菌素。