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专利号: 2022106530330
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1. 一种质粒,其特征在于,所述质粒是截去了Rop元件和/或NikA元件的pMUT1质粒;或者,所述质粒是截去元件MobB、元件MobC、元件MobD、元件Hyp中的任一或同时截去元件MobB、元件MobC、元件MobD和元件Hyp的pMUT2质粒;所述元件Rop、NikA、MobB、MobC、MobD、Hyp的序列分别如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10所示。

2.根据权利要求1所述的质粒,其特征在于,所述质粒上还含有抗性筛选标记、营养缺陷型标记、必需互补基因等。

3. 含有权利要求1或2所述质粒的重组大肠杆菌,其特征在于,以大肠杆菌Nissle 

1917及其衍生菌株作为出发菌株。

4. 根据权利要求3所述的重组大肠杆菌,其特征在于,所述重组大肠杆菌以敲除了pMUT1质粒和/或pMUT2质粒的大肠杆菌Nissle 1917为出发菌株。

5. 一种在大肠杆菌中稳定表达目的蛋白或代谢产物的方法,其特征在于,所述方法是将重组大肠杆菌在不添加抗生素的体系中培养以实现目的蛋白或代谢产物的表达;所述重组大肠杆菌的构建方法为在权利要求1或2所述的质粒上连接目的蛋白的编码基因或代谢产物相关的基因构建得到重组质粒,再将重组质粒转入大肠杆菌或其衍生菌株中得到重组大肠杆菌;所述大肠杆菌为大肠杆菌Nissle 1917。

6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,在大肠杆菌培养基中培养所述重组大肠杆菌获得种子液,再将种子液接种至不含抗生素的大肠杆菌培养基中,在35 40℃下发酵生产~目的蛋白或代谢产物。

7.根据权利要求5或6所述的方法,其特征在于,所述目的蛋白包括绿色荧光蛋白或肝素裂解酶Ⅲ。

8.权利要求1或2所述的质粒或权利要求3或4所述的重组大肠杆菌在无抗性环境中生产目的蛋白中的应用。