1.一种高效生产L‑高苯丙氨酸的方法,其特征在于,所述方法是以苯甲醛和丙酮酸为底物,采用醛缩酶、醌氧化还原酶、苯丙氨酸脱氢酶和甲酸脱氢酶进行级联酶反应,催化底物生成L‑高苯丙氨酸。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述醛缩酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示;所述醌氧化还原酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示;所述苯丙氨酸脱氢酶氨基酸序列如SEQ ID NO.6或SEQ ID NO.10所示;所述甲酸脱氢酶氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的醛缩酶、醌氧化还原酶、苯丙氨酸脱氢酶和甲酸脱氢酶共表达在同一株宿主菌中或分别表达在不同株宿主菌中。
4.一种产L‑高苯丙氨酸的基因工程菌,其特征在于,所述的基因工程菌共表达醛缩酶、醌氧化还原酶、苯丙氨酸脱氢酶和甲酸脱氢酶。
5.根据权利要求4所述的基因工程菌,其特征在于,所述醛缩酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示;所述醌氧化还原酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示;所述苯丙氨酸脱氢酶氨基酸序列如SEQ ID NO.6或SEQ ID NO.10所示;所述甲酸脱氢酶氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。
6.根据权利要求4所述的基因工程菌,其特征在于,所述的基因工程菌是以大肠杆菌为宿主。
7.根据权利要求6所述的基因工程菌,其特征在于,所述的大肠杆菌为Escherichia coli BL21(DE3)。
8.根据权利要求4所述的基因工程菌,其特征在于,所述的醛缩酶和醌氧化还原酶以pCDFDuet‑1为载体进行表达,所述的苯丙氨酸脱氢酶和甲酸脱氢酶以pRSFDuet‑1为载体进行表达。
9.权利要求4~8任一项所述的基因工程菌在生产L‑高苯丙氨酸中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,所述的应用是在如下条件下,以所述的基因工程菌为催化剂,催化苯甲醛和丙酮酸合成L‑高苯丙氨酸:+
基因工程菌的菌体量为20~30g/L,辅酶NAD为0.1~0.3mM,反应体系pH为7.5~8.5,反应温度为28~32℃,在反应过程中分批补加底物苯甲醛和丙酮酸,每批底物的补料量为40~60mM苯甲醛和40~60mM丙酮酸,在反应过程中,还包括分批补加甲酸铵,每批的补料量为
90~130mM。