1.一种以叶片为外植体的蝴蝶兰再生为完整植株的方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)蝴蝶兰无菌苗获得:将蝴蝶兰的带腋芽花梗段经一系列消毒灭菌操作后切成带芽节段,接种于初代培养基上进行培养,得到蝴蝶兰的无菌苗,然后在无菌苗增殖培养基上进行培养获得更多无菌苗;
所述初代培养基:以1/2 MS为基本培养基,附加6‑BA 5 mg/L,KT 2 mg/L,NAA 1.5 mg/L,植物凝胶3 g/L,蛋白胨1.5 g/L,蔗糖20 g/L,CM 20%,加入蒸馏水至1 L,pH调至5.5‑
5.8;
所述无菌苗增殖培养基:以花宝1号1 g/L + 花宝2号1 g/L为基本培养基,附加6‑BA 3 mg/L,TDZ 0.5 mg/L,植物凝胶3 g/L,玉米粉10 g/L,蔗糖20 g/L,CM 15%,加入蒸馏水至1 L,pH 5.5‑5.8;
2)类原球茎诱导:选取生长30‑45 d的无菌苗幼嫩叶片,将其切割成块,接种于类原球茎诱导培养基中,在黑暗条件下培养7‑10 d后转入正常光照条件下继续培养,在叶片伤口部位诱导出类原球茎;
所述类原球茎诱导培养基:以1/2 MS为基本培养基,附加6‑BA 4 mg/L,TDZ 0.7 mg/L,蔗糖30 g/L,植物凝胶3 g/L,蛋白胨1‑1.5 g/L,CM 15%,加入蒸馏水至1 L,pH 5.5‑5.8;
3)类原球茎防褐化及其增殖培养:诱导出的蝴蝶兰类原球茎接种于类原球茎防褐化及增殖培养基,在正常光照条件下,进行类原球茎的增殖培养;
所述类原球茎防褐化及增殖培养基:以1/2 MS为基本培养基,附加6‑BA 5 mg/L,AD 3 mg/L,AC 1 g/L,蔗糖15 g/L,植物凝胶3 g/L,玉米粉10 g/L,CM 15%,蛋白胨1.5 g/L,加入蒸馏水至1 L,pH 5.5‑5.8;
4)类原球茎分化培养:将类原球茎接种于类原球茎分化培养基,在正常光照条件下进行培养,使其分化出无根小苗;
所述类原球茎分化培养基:以花宝1号1 g/L + 花宝2号1 g/L为基本培养基,附加6‑BA
2 mg/L,IBA 0.5 mg/L,蔗糖 15 g/L,CM 15%‑20%,植物凝胶3 g/L,玉米粉10 g/L,加入蒸馏水至1 L,pH 5.5‑5.8;
5)生根成苗培养:将分化出的无根小苗接种于生根培养基中,在正常光照条件下进行培养,使其再生为完整植株;
所述生根培养基:以1/2 MS为基本培养基,附加6‑BA 5 mg/L,IBA 0.1‑0.2 mg/L,蔗糖
15 g/L,CM 15%,AC 0.5 g/L,植物凝胶3 g/L,加入蒸馏水至1 L,pH 5.5‑5.8。
2.根据权利要求1所述以叶片为外植体的蝴蝶兰再生为完整植株的方法,其特征在于,所述正常光照条件:光照强度为2100‑2300 lx、光照时间为14 h/d、温度为25 ± 2℃。