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专利号: 2022110098636
申请人: 营龄(武汉)生物科技有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机化学〔2〕
更新日期:2024-02-23
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种抑制Wnt‑1的活性的单克隆抗体Wnt‑1‑15C,其轻链可变区VL氨基酸序列:

QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCPGFMENMTGMWYQQKPGSSPKPWIYAPFRFTWGVPFRFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCPSEFEPKIVFGGGTKLEIK重链可变区VH氨基酸序列:

QVKLQESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFSFYAERMMWVRQAPGKGLEWVAHYNVWWGRQDFGTSCYPTARFTISRDDSQSMLYLQMHNLKTDDTAMYYCVRLGIKMAYMYYDSHWGAGTTVTVSS。

2.权利要求1所述的抑制Wnt‑1的活性的单克隆抗体Wnt‑1‑15C在制备通过抑制Wnt1/β‑catenin通路活性进而促进脐带间充质干细胞分化为肝样细胞的试剂中的用途。

3.一种生产富含IL6的细胞因子的方法,所述方法包括将脐带间充质干细胞先在阶段1培养:DMEM‑LG+20μg/L表皮生长因子+10μg/L碱性成纤维细胞生长因子,培养3d;然后阶段2培养:DMEM‑LG+体积分数为1%胎牛血清+20μg/L肝细胞生长因子+10μg/L碱性成纤维细胞生长因子+0.61g/L烟酸胺+10µg/L的Wnt‑1‑15C单抗,培养6d,每3d换液1次;最后阶段3培养:含体积分数5%胎牛血清、10 µg/L人成纤维生长因子4、10 µg/L肝细胞生长因子、10 µg/L重‑7组抑瘤素M、10µg/L的Wnt‑1‑15C单抗、10  mol/L地塞米松的HBM培养基,培养10 d即获得分化后的肝样细胞;

将所述的肝样细胞接种含10%胎牛血清的α‑MEM培养基,置于37℃、5%CO2、饱和湿度培养箱中培养5d,4℃低温1500rpm离心5min去掉细胞,上清液冷冻干燥,即得富含IL6的细胞因子组合物,其中Wnt‑1‑15C单抗是权利要求1所述的单克隆抗体。