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专利号: 2022113353720
申请人: 安徽国科门生物科技有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 农业;林业;畜牧业;狩猎;诱捕;捕鱼
更新日期:2024-10-17
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种干细胞冻存液,其特征在于,由下述组分配制而成:二甲基亚砜、甘油、乙二醇、甘露醇、海藻糖、羟乙基淀粉、人血清白蛋白、白藜芦醇-羟基化磷脂复合物、无血清基础培养基;所述二甲基亚砜的用量为5~10g/L,甘油的用量为30~40g/L,乙二醇的用量为20~30g/L,甘露醇的用量为20~30g/L,海藻糖的用量为10~20g/L,羟乙基淀粉的用量为10~20g/L,人血清白蛋白的用量为3~5g/L,白藜芦醇-羟基化磷脂复合物的用量为5~10g/L,余量为无血清基础培养基;

所述白藜芦醇-羟基化磷脂复合物的制备方法为:将白藜芦醇和羟基化磷脂加入乙醇中,在20~40℃下搅拌反应2~4h,然后旋转蒸发,即得;

所述白藜芦醇和羟基化磷脂的质量比为(0.1~0.2):10;

所述羟基化磷脂的制备方法为:将磷脂加入乙醇中搅拌均匀,然后加入乳酸和双氧水,在50~70℃下搅拌反应2~4h,反应完毕后将pH调至中性,旋转蒸发,即得;

所述磷脂为大豆卵磷脂;

所述无血清基础培养基为DMEM/F12基础培养基。

2.根据权利要求1所述的干细胞冻存液,其特征在于,所述磷脂、乳酸和双氧水的质量比为1:(0.03~0.05):(0.15~0.3)。

3.一种如权利要求1或2所述的干细胞冻存液的制备方法,其特征在于,包括下述步骤:S1、将30~40g甘油、20~30g乙二醇、20~30g甘露醇加入200~400mL无血清基础培养基中,充分溶解,得到多元醇溶液;

S2、将5~10g白藜芦醇-羟基化磷脂复合物加入所述多元醇溶液中,高压均质,然后加入5~10g二甲基亚砜、10~20g海藻糖、10~20g羟乙基淀粉、3~5g人血清白蛋白混合均匀,用无血清基础培养基补足至1000mL,即得。

4.根据权利要求3所述的干细胞冻存液的制备方法,其特征在于,S2中,高压均质的条件为:在400~800bar下循环5~10次。

5.一种干细胞的冻存方法,其特征在于,包括下述步骤:将干细胞加入权利要求1或2所述的冻存液中,先在4℃下预冷0.5~1h,然后在-20℃下冻存1~2h,然后在-80℃下冻存3~5h,转移至液氮中保存。

6.根据权利要求5所述的干细胞的冻存方法,其特征在于,所述干细胞的冻存密度为1~5×10