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专利号: 2024114714424
申请人: 清泽医疗科技(广东)有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2025-03-31
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种骨髓间充质干细胞的培养方法,其特征在于,采用培养基I用于原代培养,培养基II用于传代培养;

所述培养基I为添加3-10μg/mL紫菀酮、3-10μM褪黑素、5-12μg/mL亚油酸、4-10mM L-谷氨酰胺、10-18ng/mLbFGF、22-30μg/mL胰岛素、42-50μg/mL黄芪多糖的DMEM/F12培养基;

所述培养基II为添加45-70ng/mL ACE2、5-12μg/mL亚油酸、4-10mM L-谷氨酰胺、10-18ng/mL bFGF、22-30μg/mL胰岛素、42-50μg/mL黄芪多糖的DMEM/F12培养基。

2. 根据权利要求1所述的骨髓间充质干细胞的培养方法,其特征在于,所述培养基I为添加6μg/mL紫菀酮、6μM褪黑素、9μg/mL亚油酸、7mM L-谷氨酰胺、14ng/mL bFGF、26μg/mL胰岛素、46μg/mL黄芪多糖的DMEM/F12培养基;

所述培养基II为添加60ng/mL ACE2、9μg/mL亚油酸、7mM L-谷氨酰胺、14ng/mL bFGF、26μg/mL胰岛素、46μg/mL黄芪多糖的DMEM/F12培养基。

3.根据权利要求1或2所述的骨髓间充质干细胞的培养方法,其特征在于,具体包括以下步骤:(1)骨髓间充质干细胞的分离提取:采用密度梯度离心法分离得到骨髓间充质干细胞;

(2)骨髓间充质干细胞的原代培养:将步骤(1)所得骨髓间充质干细胞接种到培养基I中进行原代培养;

(3)骨髓间充质干细胞的传代培养:待步骤(2)骨髓间充质干细胞原代培养至融合度达80-90%时,去除培养基I,用含有0.02%EDTA的0.25%胰蛋白酶消化骨髓间充质干细胞,消化完成后离心,将离心所得骨髓间充质干细胞接种到培养基II中进行传代培养。

4.根据权利要求3所述的骨髓间充质干细胞的培养方法,其特征在于,所述步骤(2)原代培养时骨髓间充质干细胞接种密度为2×105-6×105个/mL。

5.根据权利要求3所述的骨髓间充质干细胞的培养方法,其特征在于,所述步骤(3)传代培养时骨髓间充质干细胞的接种密度为1×104-5×104个/mL。

6.根据权利要求3所述的骨髓间充质干细胞的培养方法,其特征在于,所述原代培养和传代培养均在37℃,5%CO2,饱和湿度培养箱中进行。

7.根据权利要求3所述的骨髓间充质干细胞的培养方法,其特征在于,所述原代培养和传代培养过程中每2天换液一次。